二化螟田間種群酯酶CsCaE026的表達(dá)檢測(cè).pdf

1、二化螟是我國(guó)水稻上重要的鉆蛀性害蟲之一，可造成枯心和白穗等為害癥狀，進(jìn)而導(dǎo)致嚴(yán)重的產(chǎn)量與經(jīng)濟(jì)損失。二化螟體內(nèi)具有豐富的酯酶同工酶，并與其殺蟲劑抗性密切相關(guān)。發(fā)掘二化螟酯酶基因資源，可以為害蟲田間抗性監(jiān)測(cè)與治理、新型高效“環(huán)境友好型”藥劑創(chuàng)制與開發(fā)以及農(nóng)藥殘留環(huán)境監(jiān)測(cè)和控制提供基礎(chǔ)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴二化螟酯酶基因CsCaE026的克隆和序列分析。克隆獲得二化螟酯酶基因CsCaE026的全長(zhǎng)cDNA序列，其開放閱讀框?yàn)?，

2、671bp，編碼557個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分子量63.66kD，等電點(diǎn)為5.86。預(yù)測(cè)編碼蛋白N-端前16個(gè)氨基酸為信號(hào)肽序列，且含有α/β-酯酶家族特征基序Gly-x-Ser-x-Gly和催化三聚體（Ser207、Glu339和His453）等保守結(jié)構(gòu)域以及二硫鍵結(jié)合位點(diǎn)（Cys82和Cys103）等。CsCaE026基因?qū)佴?酯酶亞家族。⑵二化螟酯酶基因CsCaE026的原核表達(dá)分析。構(gòu)建獲得CsCaE026基因重組表達(dá)載體，并在大腸桿菌

3、Rosetta菌株中誘導(dǎo)表達(dá)。重組表達(dá)產(chǎn)物分子量為70kD，且形成包涵體，未能檢測(cè)到酯酶活性。提取、純化重組表達(dá)蛋白，并制備獲得多克隆抗體。Western雜交結(jié)果證實(shí)，二化螟CsCaE026基因在大腸桿菌中成功表達(dá)。⑶二化螟酯酶基因CsCaE026的時(shí)空表達(dá)特征分析。分別采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)和蛋白Western雜交技術(shù)，分析二化螟CsCaE026基因在轉(zhuǎn)錄與翻譯水平的時(shí)空表達(dá)分布。明確CsCaE026基因在二化螟幼蟲的中腸中高水平