黃荊子乙酸乙酯提取物對翼狀胬肉增殖的影響.pdf

1、目的：觀察黃荊子乙酸乙酯提取物（the acetoacetate extract of Vitex negundo seed, Evn-50）對于體外培養(yǎng)的人翼狀胬肉成纖維細(xì)胞（human pterygium fiborblasts, HPF）增殖的影響，尋找藥物輔助治療和預(yù)防術(shù)后翼狀胬肉復(fù)發(fā)的新途徑。
　　方法：取臨床手術(shù)切除的人翼狀胬肉標(biāo)本無菌條件剪成1×1×1mm3組織塊，采用組織塊雙酶消化法（胰蛋白酶和膠原酶）原代培養(yǎng)人翼

2、狀胬肉成纖維細(xì)胞，傳至第3或4代時，以抗α-SMA蛋白抗體行免疫熒光染色，結(jié)合細(xì)胞學(xué)形態(tài)鑒定為人翼狀胬肉成纖維細(xì)胞。用0.25μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml的Evn-50作用于體外培養(yǎng)的HPF,同時設(shè)不加藥的陰性對照組，48h后觀察Evn-50對HPF細(xì)胞形態(tài)的改變，免疫熒光法檢測HPF中細(xì)胞增殖核抗原（Ki-67）的變化，流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞周期時相變化。
　　結(jié)果：（1）體外培養(yǎng)的細(xì)胞倒置

3、相差顯微鏡可見細(xì)胞形態(tài)一般為長梭形，胞核位于細(xì)胞中央，呈橢圓形；經(jīng)免疫熒光染色后，α-SMA表達(dá)陽性，可以鑒定為成纖維細(xì)胞。
　?。?）Evn-50作用48h后，流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著Evn-50濃度增大，翼狀胬肉成纖維細(xì)胞發(fā)生周期阻滯，大量的細(xì)胞停留在G0/G1期，而S期，G2/M期的細(xì)胞逐漸減少。計算其增殖率（S％+G2/M%），結(jié)果表明細(xì)胞增殖能力下降。
　?。?）Evn-50作用48h后，免疫熒光法檢測HPF中