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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:在兔頸動(dòng)脈粥樣硬化(carotid atherosclerosis,CAS)發(fā)生發(fā)展過(guò)程中,檢測(cè)胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ(insulin like-growthfactor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)的血清水平及其在頸動(dòng)脈組織中表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化,分析其與CAS進(jìn)程的關(guān)系;觀察普羅布考干預(yù)對(duì)IGF-Ⅰ血清水平和頸動(dòng)脈組織中IGF-Ⅰ表達(dá)的影響,探討普羅布考對(duì)CAS的治療作用與IGF-Ⅰ之間的關(guān)系。
方法:
1.30只雄性
2、新西蘭兔隨機(jī)分為5組,每組6只。對(duì)照組,給予普通兔飼料喂養(yǎng);剩余4組作為模型1組、模型2組、模型3組和干預(yù)組,制作頸動(dòng)脈粥樣硬化模型,造模方法為球囊損傷右側(cè)頸總動(dòng)脈內(nèi)膜,術(shù)后分別給予高脂飼料喂養(yǎng)4、8、12和12周。干預(yù)組,在造模8周后同時(shí)給予普羅布考喂食至第12周。2.分別在對(duì)照組的0、4、8和12周和模型1、2、3組和干預(yù)組的造模前后以及藥物干預(yù)前后采血測(cè)定血脂、血清IGF-Ⅰ和妊娠相關(guān)血漿蛋白A(pregnancy associa
3、tedplasma protein-A,PAPP-A)。3.分別在第4、8、12、12和12周采集模型1、2、3組、干預(yù)組和對(duì)照組的兩側(cè)頸總動(dòng)脈,應(yīng)用HE染色觀察血管內(nèi)-中膜厚度(intima-media thickness,IMT)、纖維帽、血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)和泡沫細(xì)胞。4.應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)血管組織中IGF-Ⅰ蛋白的表達(dá)。5.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈反
4、應(yīng)(Quantitative Real-time-polymerase ChainReaction,Real-Time QPCR)檢測(cè)血管組織中IGF-Ⅰ mRNA的表達(dá)。
6.對(duì)IGF-Ⅰ和CAS的進(jìn)程以及與PAPP-A的關(guān)系進(jìn)行相關(guān)性分析。
結(jié)果:
1.血脂
血清甘油三酯(Triglyceride,TG)水平:模型1組第4周較造模前和對(duì)照組第4周升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05
5、);模型2組第8周較造模前以及模型1組第4周升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);模型3組第12周較造模前升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);干預(yù)組第8周較造模前以及模型1組第4周升高,第12周較造模前升高,皆具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
血清總膽固醇(Total Cholesterol,TC)、低密度脂蛋白膽固醇(Low-density lipoprotein Cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白膽固
6、醇(High-density lipoprotein Cholesterol,HDL-C)水平:模型1組第4周較造模前和對(duì)照組第4周升高,皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);模型2組第8周較造模前和模型1組第4周升高,皆具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);模型3組第12周較造模前和模型2組第8周升高,皆具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);干預(yù)組第8周較造模前以及模型1組第4周升高,第12周較造模前升高,較模型3組第12周降低,皆具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<
7、0.05)。
2.PAPP-A
PAPP-A水平:模型1組第4周較造模前和對(duì)照組第4周升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05):模型2組第8周較造模前和模型1組第4周升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);模型3組第12周較造模前和模型2組第8周升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);干預(yù)組第8周較造模前以及模型1組第4周升高,第12周較造模前升高,較模型3組第12周降低,皆具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
8、 3.血清IGF-Ⅰ
血清IGF-Ⅰ水平:模型1組第4周較造模前和對(duì)照組4周降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);模型2組第8周較造模前和模型1組造模后降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);模型3組第12周較造模前和模型2組第8周降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);干預(yù)組第8周較造模前以及模型1組第4周降低,第12周較造模前降低,較模型3組第12周升高,皆具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
4.病理形態(tài)學(xué)觀察
9、
對(duì)照組兔兩側(cè)頸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完整,單層排列并緊貼內(nèi)彈力板,中層VSMCs呈長(zhǎng)條型或橢圓型,胞漿呈嗜酸性紅染,排列整齊。模型1組第4周:手術(shù)側(cè),動(dòng)脈內(nèi)膜輕度增殖,內(nèi)膜下有一些散在分布的大小不等的泡沫細(xì)胞,可見(jiàn)較完整的內(nèi)彈力板;對(duì)側(cè),頸動(dòng)脈病理特征類似于對(duì)照組。模型2組第8周:手術(shù)側(cè),動(dòng)脈內(nèi)膜增厚,內(nèi)皮細(xì)胞部分脫離,可見(jiàn)粥樣斑塊并有“纖維帽”覆蓋,斑塊肩部也有一定量的纖維組織分布,部分斑塊中可見(jiàn)炎癥細(xì)胞侵潤(rùn),內(nèi)膜下泡沫細(xì)胞和V
10、SMCs顯著增多,中層VSMCs排列紊亂并且數(shù)量減少,而胞漿淡染的泡沫細(xì)胞增多,并經(jīng)內(nèi)彈力板向斑塊部位游走;對(duì)側(cè),頸動(dòng)脈病理特征類似于模型1組第4周手術(shù)側(cè)。模型3組第12周:手術(shù)側(cè),內(nèi)膜進(jìn)一步增厚,細(xì)胞數(shù)目減少而體積增大,細(xì)胞外基質(zhì)增多,血管腔幾乎被粥樣斑塊堵塞,斑塊中有大量泡沫細(xì)胞,基底部VSMCs增生明顯,內(nèi)彈力板斷裂或溶解,中膜變薄,內(nèi)中膜之間常見(jiàn)裂隙;對(duì)側(cè),頸動(dòng)脈病理特征類似于模型2組第8周手術(shù)側(cè)。干預(yù)組第12周:較模型2組第8
11、周無(wú)明顯改變。
5.免疫組織化學(xué)結(jié)果
與對(duì)照組比較,模型組第4、8、12周和干預(yù)組第12周血管組織內(nèi)IGF-Ⅰ蛋白局部表達(dá)陽(yáng)性面積百分比顯著升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)
6.Real-Time QPCR檢測(cè)結(jié)果
模型1組第4周,手術(shù)側(cè)和對(duì)側(cè)血管組織內(nèi)IGF-Ⅰ mRNA表達(dá)較對(duì)照組升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。模型2組第8周,手術(shù)側(cè)血管組織中IGF-Ⅰ mRNA表達(dá)
12、較對(duì)側(cè)和模型1組第4周手術(shù)側(cè)升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。模型3組第12周,手術(shù)側(cè)血管組織內(nèi)IGF-Ⅰ mRNA表達(dá)較對(duì)側(cè)和模型2組第8周手術(shù)側(cè)升高;對(duì)側(cè)血管組織內(nèi)IGF-Ⅰ mRNA表達(dá)較模型2組第8周對(duì)側(cè)升高,皆具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。干預(yù)組第12周,手術(shù)側(cè)血管組織內(nèi)IGF-ⅠmRNA表達(dá)較對(duì)側(cè)、模型2組第8周手術(shù)側(cè)高,比模型3組手術(shù)側(cè)減少;對(duì)側(cè)血管組織內(nèi)IGF-Ⅰ mRNA表達(dá)較模型3組第12周對(duì)側(cè)減少,較模型2組
13、第8周對(duì)側(cè)高,皆具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
7.相關(guān)分析
CAS的進(jìn)程與血清IGF-Ⅰ水平成負(fù)相關(guān)(P<0.001),與血管組織內(nèi)IGF-Ⅰ mRNA的表達(dá)成正相關(guān)(P<0.001);PAPP-A水平與血清IGF-Ⅰ水平成負(fù)相關(guān)(P<0.001)。
結(jié)論:
1.CAS的發(fā)生發(fā)展與血清IGF-Ⅰ水平的下降存在相關(guān)性;
2.CAS的發(fā)生發(fā)展與血管組織內(nèi)IGF-Ⅰ表達(dá)
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