大鼠咬合創(chuàng)傷早期牙槽骨基因表達(dá)差異的初步探討.pdf

1、咬合創(chuàng)傷是口腔臨床常見(jiàn)疾病之一，是由于咬合關(guān)系不正常或咬合力量不協(xié)調(diào)，個(gè)別或某幾個(gè)牙所受的咬合力量超過(guò)其牙周組織的耐受力而造成的牙周組織損傷情況，咬合創(chuàng)傷嚴(yán)重者可導(dǎo)致牙槽骨的吸收，牙槽骨吸收是一個(gè)復(fù)雜的生物過(guò)程，涉及成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、成千上萬(wàn)細(xì)胞因子及其構(gòu)成的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。對(duì)咬合創(chuàng)傷導(dǎo)致骨吸收機(jī)制的研究是目前口腔醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)，其具體分子生物學(xué)機(jī)制目前尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)希望通過(guò)建立大鼠咬合創(chuàng)傷動(dòng)物模型，觀察咬

2、合創(chuàng)傷不同時(shí)間大鼠牙周組織破壞情況，并采用全功能組表達(dá)譜基因芯片技術(shù)對(duì)大鼠咬合創(chuàng)傷早期牙槽骨基因表達(dá)差異進(jìn)行初步探討，進(jìn)一步明確咬合創(chuàng)傷導(dǎo)致牙槽骨吸收的分子生物學(xué)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)一咬合創(chuàng)傷對(duì)大鼠牙周組織的影響目的:研究不同作用時(shí)間咬合創(chuàng)傷對(duì)大鼠牙周組織的影響。方法:通過(guò)在大鼠右側(cè)上頜第一磨牙粘接鋼絲法建立同側(cè)下頜咬合創(chuàng)傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，分別于24小時(shí)、3天、7天、14天后取該側(cè)下頜第一磨牙牙槽骨為實(shí)驗(yàn)組，以正常大鼠右側(cè)下頜第一磨牙為對(duì)照組，進(jìn)行

3、X線攝像觀察、HE染色、MMP-9免疫組織化學(xué)染色，采用單因素方差分析對(duì)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:X線片顯示對(duì)照組骨小梁清晰，骨硬板連續(xù)完整，未見(jiàn)明顯骨吸收區(qū)。24h組、3天組、7天組未見(jiàn)明顯牙周膜增寬，14天組根尖區(qū)牙周膜明顯增寬。1
　　 HE染色結(jié)果顯示:隨著咬合創(chuàng)傷時(shí)間增加，牙周纖維出現(xiàn)斷裂、變性，多核細(xì)胞逐漸，出現(xiàn)骨吸收陷窩，且病變隨咬合創(chuàng)傷時(shí)間延長(zhǎng)越來(lái)越顯著。
　　 免疫組織化學(xué)染色顯示:咬合創(chuàng)

4、傷各組大鼠根周牙槽骨中均見(jiàn)MMP-9陽(yáng)性染色細(xì)胞，且隨著咬合升高時(shí)間的延長(zhǎng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目逐漸增多。MMP-9陽(yáng)性染色細(xì)胞百分比24h組與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其余各組與對(duì)照組相比皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論:
　　 X線片、HE染色及免疫組織化學(xué)染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)咬合創(chuàng)傷可以導(dǎo)致大鼠牙周組織破壞，且破壞隨時(shí)間延長(zhǎng)越來(lái)越嚴(yán)重。
　　 實(shí)驗(yàn)二大鼠咬合創(chuàng)傷早期牙槽骨基因表達(dá)差異的基因芯片研究
　　 目的:
　　

5、 對(duì)大鼠咬合創(chuàng)傷早期牙槽骨基因表達(dá)差異進(jìn)行初步探討，進(jìn)一步明確咬合創(chuàng)傷導(dǎo)致牙槽骨吸收的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 方法:
　　 建立大鼠咬合創(chuàng)傷動(dòng)物模型，咬合創(chuàng)傷24h取大鼠雙側(cè)下頜牙槽骨組織，提取樣本總RNA進(jìn)行包括27000個(gè)基因在內(nèi)的全功能組表達(dá)譜基因芯片檢測(cè)，對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行Pathway和GO分析，并選取代表性基因采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)對(duì)芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 結(jié)果:
　　 全

6、功能組表達(dá)譜基因芯片結(jié)果顯示，與對(duì)側(cè)牙槽骨組織相比咬合創(chuàng)傷側(cè)差異表達(dá)基因共有586個(gè)，其中表達(dá)增強(qiáng)166個(gè)，表達(dá)降低420個(gè)，Pathway分析涉及106個(gè)不同的信號(hào)通路，GO分析主要涉及270個(gè)不同的功能分類，RT-PCR驗(yàn)證與芯片結(jié)果一致。
　　 結(jié)論:
　　 通過(guò)芯片結(jié)果、Pathway及GO分析發(fā)現(xiàn):咬合創(chuàng)傷24h牙槽骨正常的骨平衡狀態(tài)已經(jīng)被打破，成骨細(xì)胞及相關(guān)的成骨活動(dòng)受到抑制，而此時(shí)破骨細(xì)胞活性及破骨現(xiàn)象增強(qiáng)