基因芯片分析糖尿病大鼠種植體周圍骨組織的差異表達基因.pdf

1、目的:
　　 應用基因表達譜芯片對糖尿病與正常大鼠種植體周圍骨組織的基因表達譜進行對比分析并篩選差異基因，對其涉及的生物過程進行分析，為探討糖尿病影響種植體骨結合的分子生物學機制及治療方法提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.建立糖尿病大鼠模型選取20只體質量為（280±20）g的雄性健康Wistar大鼠，隨機分為正常組和糖尿病組，每組10只。糖尿病組大鼠腹腔注射STZ55mg/kg誘導糖尿病大鼠模型，正常組大

2、鼠腹腔注射等量生理鹽水。72h后，糖尿病組大鼠尾尖取血測血糖濃度，高于16.7mmol/L則為建模成功。
　　 2.種植體植入和標本采集4％水合氯醛(100mg/kg)腹腔注射麻醉2組大鼠，在右側脛骨近骺端植入一顆1.4mm×4mm的純鈦種植體。術后常規(guī)飲食喂養(yǎng)，糖尿病組大鼠定期每周測血糖，剔除血糖低于16.7mmol/L的大鼠。3個月后，大鼠于獲取標本當天拍右側脛骨側位片，后全麻下分離右側脛骨，截取種植體外周約1mm的骨組織，

3、PBS液反復沖洗后，放入液氮罐內(nèi)備用。
　　 3.全基因組表達譜芯片Trizol法分別提取糖尿病組及正常組種植體周圍骨組織的總RNA，分光光度計及變性瓊脂糖凝膠電泳質檢。通過逆轉錄法將Cy3熒光標記到實驗組及對照組的cDNA上，制成探針，并與表達譜芯片進行雜交及掃描芯片熒光信號圖像，采用GenePix4000B掃描儀掃描芯片，GenePixproV6.0讀取芯片的原始信號。以2倍的差異表達值(Ratio)篩選差異表達基因，并對差

4、異基因涉及的生物過程進行分析。
　　 4.RT-PCR驗證芯片結果選取芯片結果中表達顯著差異的2個因子采用RT-PCR技術觀察表達改變情況，對芯片結果進行RT-PCR驗證。
　　 結果:
　　 1.正常大鼠切口愈合良好，無炎癥，無感染，糖尿病大鼠偶有精神不振，出現(xiàn)多食、多飲、多尿癥狀，個別感染死亡。X線片示:正常組大鼠種植體與周圍骨緊密接觸，X線透射區(qū)基本消失;糖尿病組種植體周圍仍可見不同程度的透射區(qū)。
　

5、　 2.本實驗應用全基因組表達譜芯片對糖尿病與正常大鼠種植體周圍骨組織中17983個基因進行分析，篩選出差異基因1084個，其中糖尿病組表達增強352個，表達降低732個。對實驗結果進行GO分析，發(fā)現(xiàn)差異基因涉及多個生物學過程，其中骨代謝和脂類代謝與種植體骨結合密切相關。
　　 結論:
　　 1.大鼠腹腔一次性大劑量注射STZ法可以建立穩(wěn)定可靠的糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠植入種植體后，種植體和骨組織的結合水平較正常大鼠