轉(zhuǎn)染IKK2dn的受者樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的CD4+CD25-T細(xì)胞延長腎移植大鼠生存時(shí)間的研究.pdf

1、目的:建立大鼠同種異體腎移植的急性排斥反應(yīng)動(dòng)物模型，觀察轉(zhuǎn)染重組腺病毒介導(dǎo)的IKK2dn（recombinantadenovirus-mediatedIKK2dn，Adv-IKK2dn）基因并負(fù)載供者抗原的受者樹突狀細(xì)胞（dendriticcells，DC）誘導(dǎo)產(chǎn)生的CD4+CD25-T細(xì)胞回輸是否延長同種異體腎移植大鼠的生存時(shí)間，并探討其機(jī)制。
　　 方法:應(yīng)用5ng/ml大鼠源性粒細(xì)胞一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granuloc

2、ytemacrophagecolonystimulatingfactor，GM-CSF)和5ng/ml大鼠源性白細(xì)胞介素4(interleukin-4，IL-4)誘導(dǎo)Lewis大鼠（受者）骨髓源性細(xì)胞分化為未成熟DC(immaturedendriticcells，imDC)。收集第5d細(xì)胞，Adv-IKK2dn轉(zhuǎn)染DC,48h后收集細(xì)胞與BN大鼠（供者）抗原肽共孵育,48h后收集懸浮的細(xì)胞為轉(zhuǎn)染IKK2dn并負(fù)載供者抗原的受者DC。將轉(zhuǎn)

3、染IKK2dn并負(fù)載供者抗原的受者DC與受者T細(xì)胞混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixedlymphocytereaction，MLR)，共培養(yǎng)72h后，采用免疫磁珠分離法(magneticactivatedcellsorting，MACS)分選CD4+CD25-T細(xì)胞，體外擴(kuò)增培養(yǎng)。腎移植受者為Lewis大鼠，分為初始T細(xì)胞組、AdvO-CD4+T細(xì)胞組、CD4+CD25-T細(xì)胞組、排斥組，術(shù)前7d分別輸注1×107個(gè)初始CD4+T細(xì)胞、Adv-

4、0-DC誘導(dǎo)產(chǎn)生的CD4+CD25-T細(xì)胞、Adv-IKK2dn-DC誘導(dǎo)產(chǎn)生的CD4+CD25-T細(xì)胞和等量生理鹽水，供者均為BN大鼠。另設(shè)第三方供者組，術(shù)前處理同CD4+CD25-T細(xì)胞組，供者為Wistar大鼠。移植術(shù)后觀察各組大鼠生存時(shí)間;測定受者T淋巴細(xì)胞增殖能力;檢測血清白細(xì)胞介素2(interleukin-2，IL-2)、白細(xì)胞介素10（interleukin-10，IL-10）、γ干擾素(interferon-γ，IFN

5、-γ)以及轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforminggrowthfactor-β，TGF-β)表達(dá)水平;監(jiān)測血清肌酐水平;移植腎的病理學(xué)檢查，判斷排斥反應(yīng)程度。
　　 結(jié)果:1、流式細(xì)胞儀檢測第5dDC表型:CD80、CD86、MHC-Ⅱ的陽性表達(dá)率較低，分別為19.0±2.01％，17.3±1.17%、27.1±2.11%，DC處于未成熟狀態(tài)。2、初次MLR結(jié)果顯示，與負(fù)載供者抗原的未轉(zhuǎn)染的DC以及轉(zhuǎn)染空載體的DC(Adv-O

6、-DC)相比，Adv-IKK2dn-DC刺激受者T細(xì)胞增殖能力低下，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3、Adv-IKK2dn-DC在體外可以刺激Lewis大鼠T細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生CD4+CD25-T細(xì)胞，Adv-IKK2dn-DC誘導(dǎo)產(chǎn)生的CD4+T細(xì)胞中低表達(dá)CD25（17.8＜0.89%），與對照組（72.8±1.99%）及轉(zhuǎn)染Adv-0組（63.3+1.70%）相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。收獲的CD4+CD25-T細(xì)胞經(jīng)

7、流式細(xì)胞儀檢測純度達(dá)到94.2＜1.91%，經(jīng)體外培養(yǎng)擴(kuò)增后，細(xì)胞數(shù)量可達(dá)到2.0～2.5x106個(gè)/ml。4、CD4+CD25-T細(xì)胞組腎移植大鼠生存時(shí)間為(28.5±2.36)d，較其他各組顯著延長(P＜0.01）;與其他各組相比，CD4+CD25-T細(xì)胞組表達(dá)高水平IL-10和TGF-p(P＜0.05或P＜0.01);與排斥組、AdvO-CD4+T細(xì)胞組、第三方供者組相比，CD4+CD25-T細(xì)胞組低表達(dá)IL-2和IFN-γ(P＜