雷帕霉素對肝臟移植受者外周血CD4+CD25highFOXP3+T細胞數量和功能的影響.pdf

1、目的：器官移植的理想狀態(tài)是免疫耐受,即在停用免疫抑制劑后不僅能維持移植物功能,但同時保留受者對外源性抗原的免疫應答。部分器官移植受者在停用免疫抑制劑后并未出現(xiàn)移植物排斥反應,特別是在肝移植受者中較常見。研究表明CD4+CD25+調節(jié)性T細胞(regulatory T cell,Tregs)介導的免疫調節(jié)在誘導移植物免疫耐受中起重要作用。Tregs能下調機體對同種異體抗原的免疫應答。Tregs細胞在維持外周免疫耐受及穩(wěn)定中起到了關鍵作用。

2、影響Tregs細胞發(fā)育及活性發(fā)揮的因素很多,新近發(fā)現(xiàn)的叉頭/翼狀螺旋轉錄因子(forkhead box P3,小鼠為Foxp3,人類為FOXP3),因其直接主控Tregs細胞表型及活性,在機體自身免疫的穩(wěn)定中起到了決定性作用,成為研究Tregs細胞調控的焦點。本研究應用流式細胞儀檢測了不同免疫抑制方案(雷帕霉素、鈣調蛋白抑制劑)肝移植受者外周血Tregs數量及FOXP3 mRNA表達,同時體外分析研究CD4+CD25+調節(jié)性T淋巴細胞的

3、免疫抑制功能,旨在探索不同免疫抑制劑對肝移植受者外周血CD4+CD25highFOXP3+調節(jié)性T細胞數量和功能的影響,Tregs細胞角度證實何種免疫抑制劑有利于肝移植受者免疫耐受的建立,從而為臨床更為合理選用免疫抑制方案提供理論依據。
　　 方法：
　　 1、選擇47例應用不同免疫抑制方案肝移植受者(肝功能穩(wěn)定大于2年)和38例年齡性別相配的健康人群作為正常對照組,肝移植受者免疫抑制方案分2組[雷帕霉素組15例,鈣調蛋

4、白抑制劑組(他克莫司)32例]。流式細胞儀檢測外周血單個核細胞CD4、CD25和FOXP3的表達水平。比較各組之間外周血Tregs水平的差異。
　　 2、采用Real time PCR.分析上述肝移植受者和健康人群外周血單個核細胞FOXP3mRNA表達水平。
　　 3、通過對上述肝移植受者外周血中CD4+CD25+調節(jié)性T淋巴細胞抑制CD4+CD25.T淋巴細胞功能與健康人群外周血中CD4+CD25+調節(jié)性T淋巴細胞抑制

5、CD4+CD25-T淋巴細胞功能對比的分析,探討CD4+CD25+調節(jié)性T淋巴細胞在不同免疫抑制劑的影響下功能有無障礙,同時探討何種免疫抑制劑有利于免疫耐受的建立。
　　 結果：外周血Tregs占總淋巴細胞的比例,雷帕霉素組顯著高于鈣調蛋白抑制劑組和正常對照組,鈣調蛋白抑制劑組顯著低于正常對照組。雷帕霉素組顯著高于鈣調蛋白抑制劑組和正常對照組[0.50％(0.42 to0.86)vs.0.15％(0.12 to0.22)vs.0

6、.22％(0.12 to0.49),P＜0.01],鈣調蛋白抑制劑組顯著低于正常對照組(P=0.03)。大于95％CD4+CD25highT細胞、小于20％的CD4+CD25lowT細胞和O％的CD4+CD25-T細胞表達FOXP3。采用Real time PCR研究分析在應用不同免疫抑制方案肝移植受者和正常對照組外周血單個核細胞FOXP3mRNA的表達。雷帕霉素組顯著高于鈣調蛋白抑制劑組和正常對照組,鈣調蛋白抑制劑組FOXP3mRNA

7、表達顯著低于健康對照組(P＜0.01),均具有統(tǒng)計學意義。分選的CD4+CD25+及CD4+CD25-T細胞在不同的比例下進行培養(yǎng),MTT法測定A值并進行抑制率的計算,發(fā)現(xiàn)無論是何種免疫抑制方案的肝移植受者還是健康人群,當CD4+CD25+和CD4+CD25-T細胞的比例為1:1時有最大的抑制率。與健康對照者的CD4+CD25+Tregs細胞的增殖能力相比,肝移植受者CD4+CD25+Tregs細胞的增殖能力無明顯差異(P＞0.05),

8、從不同免疫抑制方案的肝移植受者分離的Tregs細胞對健康人群分離的效應細胞的增殖抑制力無明顯差異。
　　 結論：不同免疫抑制方案對肝移植受者外周血Tregs的數量產生不同的影響。從調節(jié)性T細胞的角度雷帕霉素更有助于肝移植受者產生免疫耐受,然而鈣調蛋白抑制劑阻礙免疫耐受的建立。本實驗研究表明,外周血Tregs的水平與FOXP3mRNA在外周血單個核細胞的表達呈正相關。不同免疫抑制劑的肝移植受者外周血CD4+CD25high FOX