特異激活SHH信號(hào)通路對(duì)急性腦缺血大鼠NGF、BDNF表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的：
　　缺血性腦血管疾病的病理?yè)p傷機(jī)制極為復(fù)雜。近年來的研究發(fā)現(xiàn)了一些具有神經(jīng)保護(hù)作用的因子，在缺血性腦血管疾病的恢復(fù)過程中發(fā)揮著重要作用。其中，神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor,NGF)與腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)二者屬于神經(jīng)生長(zhǎng)因子家族，也稱神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素(NTs)。兩者能夠促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)中成熟神經(jīng)元的正常功

2、能的維持也是非常必要的。
　　Shh信號(hào)通路在胚胎發(fā)育及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中扮演十分重要的角色。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，腦缺血后激活Shh信號(hào)通路可以促進(jìn)室下區(qū)(subventricular zone，SVZ)神經(jīng)元細(xì)胞的再生。Shh信號(hào)通路由以下幾部分組成:Shh蛋白、Ptch蛋白、Smo蛋白和鋅指轉(zhuǎn)錄因子Gli蛋白。Shh信號(hào)通路被激活以后，Shh和Ptch結(jié)合，解除Smo的抑制效應(yīng)，Smo可促使細(xì)胞核中的Gli蛋白誘導(dǎo)目的基因的表達(dá)。下

3、游靶基因Gli蛋白的表達(dá)將增加，因此可以將Gli蛋白作為Shh信號(hào)是否激活的標(biāo)志。
　　本實(shí)驗(yàn)通過線栓法制作永久性大腦中動(dòng)脈缺血模型，通過免疫組化法檢測(cè)缺血側(cè)腦組織中NGF、BDNF的表達(dá)，觀察Purmorphamine特異激活Shh信號(hào)通路后NGF、BDNF的變化進(jìn)而論述激活Shh信號(hào)通路在腦缺血中的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　材料與方法：
　　選取SD大鼠，運(yùn)用線栓法制作永久性大腦中動(dòng)脈缺血模型(MCAO)。選取健康成年雄

4、性SD大鼠110只，SPF級(jí)，體重190～250g。實(shí)驗(yàn)分組如下:假手術(shù)組（A組）;缺血組（B組）;藥物干預(yù)組（C組）。其中，假手術(shù)組10只，缺血組和藥物干預(yù)組按照時(shí)間點(diǎn)的不同可分為5個(gè)亞組即6h，24h，48h，72h，7天，每個(gè)亞組10只。假手術(shù)組只分離血管不插線栓。缺血組和藥物干預(yù)組采用線栓法造模。藥物干預(yù)組在造模成功后立即腹腔注射Purmorphamine溶液（0.691mg/kg）。Purmorphamine溶液配制方法:溶于

5、有機(jī)溶劑二甲基甲酰胺(DMF)，并且完全溶解。假手術(shù)組和缺血組給予同等劑量的DMF。成功造模后，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否具有神經(jīng)缺損癥狀，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分法，評(píng)分不達(dá)標(biāo)的動(dòng)物均棄之不用，排除出組的動(dòng)物在后續(xù)的試驗(yàn)中予以補(bǔ)充。于既定時(shí)間點(diǎn)，取出腦組織標(biāo)本。免疫組化法檢測(cè)缺血側(cè)腦組織的NGF、BDNF的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶反應(yīng)(Real-time PCR)檢測(cè)缺血側(cè)腦組織Gli-1mRNA的表達(dá)。
　　數(shù)據(jù)處理：
　　采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)

6、軟件處理數(shù)據(jù)，所有結(jié)果均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。組間比較用單因素方差分析，兩兩比較用LSD檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn):a=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.各組NGF的表達(dá)情況
　　假手術(shù)組有少量NGF表達(dá)。缺血組、藥物干預(yù)組在缺血后6小時(shí)即有表達(dá)。24小時(shí)表達(dá)明顯增多，在缺血72小時(shí)達(dá)到峰值，之后呈下降趨勢(shì)。缺血組、藥物干預(yù)組和假手術(shù)組相比，NGF表達(dá)明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。藥物干預(yù)組和缺血組各時(shí)間點(diǎn)

7、相比，NGF表達(dá)明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.各組BDNF的表達(dá)情況
　　假手術(shù)組有少量BDNF表達(dá)。缺血組、藥物干預(yù)組在缺血后6小時(shí)即有表達(dá)。至72小時(shí)達(dá)到峰值，之后呈下降趨勢(shì)。缺血組、藥物干預(yù)組和假手術(shù)組相比，BDNF表達(dá)明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。藥物干預(yù)組和缺血組各時(shí)間點(diǎn)相比，BDNF表達(dá)明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　3.各組Gli-1mRNA的

8、表達(dá)情況
　　假手術(shù)組有少量Gli-1mRNA表達(dá)。缺血組、藥物干預(yù)組在缺血后6小時(shí)即有表達(dá)。24小時(shí)表達(dá)明顯增多，之后呈下降趨勢(shì)。缺血組、藥物干預(yù)組和假手術(shù)組相比，Gli-1mRNA表達(dá)明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。藥物干預(yù)組和缺血組各時(shí)間點(diǎn)，Gli-1mRNA表達(dá)明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.外源性給予Purmorphamine后，可以有效激活Shh信號(hào)通路。<