池塘養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)及其與益生菌調(diào)控的關(guān)系.pdf

1、本研究從微生態(tài)角度出發(fā)，對池塘養(yǎng)殖牙鮮 olivaceus)腸道菌群結(jié)構(gòu)及其影響因素進行了初步分析，同時向養(yǎng)殖池塘環(huán)境中添加微生態(tài)制劑，探索了微生態(tài)制劑對池塘環(huán)境的改變及養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群的應(yīng)答變化，以期為今后牙鲆池塘養(yǎng)殖專用微生態(tài)制劑的研制和養(yǎng)殖環(huán)境微生態(tài)調(diào)控技術(shù)構(gòu)建提供理論依據(jù)，同時有利于建立池塘養(yǎng)殖牙鲆健康生長調(diào)控技術(shù)。本研究主要包括三個部分:工廠化和池塘養(yǎng)殖模式下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)的比較分析、益生菌的分離培養(yǎng)及其水質(zhì)調(diào)控效果評價、池

2、塘環(huán)境及養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群對益生菌調(diào)控的響應(yīng)。主要研究結(jié)果如下：
　　1、工廠化和池塘養(yǎng)殖模式下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)的比較分析
　　為比較池塘和工廠化養(yǎng)殖條件下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)差異及其與餌料、水環(huán)境、底質(zhì)等的關(guān)系，采用MiSeq高通量測序技術(shù)和生物信息學分析手段，構(gòu)建了牙鲆腸道、養(yǎng)殖水體、餌料和池塘底泥等7個樣品的16s rRNA基因測序文庫，分析了不同樣品中菌群組成和生物多樣性。結(jié)果表明：池塘養(yǎng)殖牙鲆腸道（B1)中以厚壁菌門（3

3、0.49％)、變形菌門（19.16%)和梭桿菌門（11.11%)為主，其中芽孢桿菌屬（27.66%)占絕對優(yōu)勢，弧菌屬（0.16%)豐度最?。还S化養(yǎng)殖牙鲆腸道（B5)中以變形菌門（44.31%)、厚壁菌門（11.57%)和放線菌門（4.79%)為主，其中不動桿菌屬（10.37%)豐度最大，弧菌屬（4.05%)相對B1中豐度較高。牙鲆腸道優(yōu)勢菌群主要與營養(yǎng)代謝調(diào)節(jié)相關(guān)，同時有益微生物和有害微生物也是腸道菌群的重要組成部分。差異性和系統(tǒng)進

4、化分析表明兩種養(yǎng)殖條件下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)與餌料中菌群關(guān)系密切，此外受養(yǎng)殖水環(huán)境中菌群影響較大。池塘養(yǎng)殖模式下牙鲆腸道菌群結(jié)構(gòu)受底質(zhì)影響相對較小。
　　2、兩株益生菌的分離培養(yǎng)及水質(zhì)調(diào)控效果評價
　　篩選了一種微生態(tài)制劑，具有較好的養(yǎng)殖水質(zhì)調(diào)控效果。為進一步鑒定其有效成分，綜合利用基于細菌16S rRNA基因文庫的Miseq高通量測序技術(shù)、生物信息學分析方法、細菌純化培養(yǎng)技術(shù)等手段，認識了該種微生態(tài)制劑的菌群組成，對可培養(yǎng)的兩

5、株優(yōu)勢菌種進行分離純化，探明了其生理生化特性，鑒定了其分類地位，摸清了適宜的培養(yǎng)條件，驗證了實驗室條件下的水質(zhì)處理效果，為下一步益生菌的分離純化和生產(chǎn)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。實驗結(jié)果顯示：該微生態(tài)制劑中主要的菌群包括腸桿菌屬（31.99%)、芽孢乳桿菌屬（31.81%)、乳桿菌屬（15.8%)、芽孢桿菌屬（1.44%)等，另有18.96%的細菌尚未分類。經(jīng)分離純化，培養(yǎng)基篩選、形態(tài)學鑒別、生理生化反應(yīng)、分子生物學鑒定，得到植物乳桿菌A、芽孢桿菌

6、B兩株有益菌。在實驗室條件下摸索兩株菌的最適生長條件，結(jié)果顯示：植物乳桿菌A、芽孢桿菌B的最適生長p H分別為6.5、6.0，最適生長溫度分別為30℃、36℃。為了在實驗室條件下評價其水質(zhì)調(diào)控能力，采用水楊酸鹽法、重氮化作用法、PhodVer3抗壞血酸法分別驗證其對氨氮、亞硝酸鹽、磷酸鹽的降解能力。結(jié)果表明：植物乳桿菌A(OD600nm=2.33)、芽孢桿菌B(OD600nm=2.23)培養(yǎng)達到最大密度時，按照10:1混合使用凈化水質(zhì)效

7、果最好，對水體中氨氮、亞硝酸鹽、磷酸鹽的降解率分別達到了73.1%、57.8%、52.4%。
　　3、池塘環(huán)境及養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群對益生菌調(diào)控的響應(yīng)
　　為評價一種微生態(tài)制劑對池塘養(yǎng)殖水環(huán)境及養(yǎng)殖牙鲆腸道菌群的調(diào)控效果，采用MiSeq高通量測序技術(shù)和生物信息學分析手段，構(gòu)建了牙鲆腸道、養(yǎng)殖水體、餌料和池塘底泥等4批次22個樣品的16s rRNA基因測序文庫，分析了不同樣品中菌群組成和生物多樣性在微生態(tài)制劑調(diào)控過程中的變化趨勢。

8、結(jié)果表明，試驗期間，微生態(tài)制劑對養(yǎng)殖水體中氨氮降解率最高達到88.9%;亞硝酸鹽含量降解率最高達到67.9%，磷酸鹽降解率最高達到69%。另一方面，池塘水體中葉綠素含量增加了19.05%，擬桿菌門菌群呈增加趨勢，變形菌門呈下降趨勢；底泥中芽孢桿菌屬變化最為明顯，由最初的3.78%增加到33.64%。牙鲆腸道中腸桿菌屬、軍團桿菌屬、不動桿菌屬均有不同程度的增加，弧菌屬相對豐度由最初的0.16%降低到0.05%。另外，還在牙鲆腸道內(nèi)檢測到植