2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:應(yīng)用利多卡因致大鼠中毒驚厥模型,測(cè)定中毒驚厥過程中海馬CA1區(qū)細(xì)胞外液一氧化氮含量,并應(yīng)用一氧化氮合酶阻滯劑7-硝基吲哚(7-NI),觀察nNOS的活性以及一氧化氮含量的變化,探討一氧化氮在利多卡因致大鼠中毒驚厥過程中的作用機(jī)制。 方法:健康雄性Wistar大鼠24只,體重250±20g(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。隨機(jī)隨機(jī)分為3組,每組8只。大鼠異氟烷(isoflurane)麻醉后氣管插管吸氧自主呼吸。股靜脈切開置管

2、以1ml/hr的速度輸入乳酸鈉林格氏液。動(dòng)物立體固定后,頭皮刺入電極持續(xù)監(jiān)測(cè)EEG。切開頭皮,用微型顱鉆在海馬CA1區(qū)(前囟(bregma)后方3.6mm和左方2mm處)打開一直徑約2mm的圓孔,將微透析探針刺入大腦皮層2mm,用乳酸鈉林格氏液以2μl/min的速度灌注,穩(wěn)定60min后收集腦組織透析液20min,之后按照實(shí)驗(yàn)分組給與不同的處理。利多卡因組(L組):給予2mg負(fù)荷劑量后,以4mg·kg-1·min-1的速度經(jīng)股靜脈持續(xù)泵

3、入利多卡因,空白對(duì)照組(S組)以相同速度泵入乳酸鈉林格氏液。7-NI組(7-NI組):靜脈泵入利多卡因前30min腹腔內(nèi)注射30mg/kg nNOS抑制劑7-NI(7-硝基吲唑),其它2組于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)腹腔內(nèi)注射等容積生理鹽水。腹腔注射30min后繼續(xù)收集微透析液,每隔20min收集一次,共收集40min,連同最初20min的透析液一起-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩S^察驚厥波(EEG上出現(xiàn)振幅超過100μV寬大快速的脊波并持續(xù)5-10秒以上)出現(xiàn)

4、后,停止泵入利多卡因。7-NI組若不出現(xiàn)驚厥波則泵入利多卡因與預(yù)實(shí)驗(yàn)中保證絕大多數(shù)大鼠出現(xiàn)驚厥波時(shí)泵入利多卡因相當(dāng)(由統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算95%可信區(qū)間)。記錄驚厥波發(fā)生及持續(xù)時(shí)間,呼吸減弱或消失及恢復(fù)時(shí)間。標(biāo)本的采集及檢測(cè)方法: (1)微透析液的收集及測(cè)定:所有組在建立了靜脈通路并固定后,用腦立體定位儀固定大鼠頭部,沿頭部中線位置剪開頭皮,分離軟組織,在前囟后方3.6mm,旁開2.0mm鉆開顱骨,挑開硬腦膜并放置透析針,以2μl/mi

5、n的速度推進(jìn)微量推進(jìn)泵。從微透析針出口端至收集管全程保持在0-4℃環(huán)境下,微透析液收集完后放置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。微透析液用來測(cè)量CA1區(qū)一氧化氮濃度,采用CAYMAN公司的Nitrate/Nitrite Colorimetric AssayKit(Cat No780001)對(duì)NO進(jìn)行微量測(cè)定,測(cè)量條件和步驟依照試劑盒說明進(jìn)行。 (2)微透析液留取完畢后深麻醉下(5%異氟烷麻醉)沿肋緣剪開胸廓暴露升主動(dòng)脈和心臟,提起心尖剪開

6、左心室,經(jīng)左心室插灌注針至升主動(dòng)脈并固定,接灌流沖洗液和固定液(4%多聚甲醛),同時(shí)剪開右心耳并開始推注沖洗液和固定液進(jìn)行全身固定。固定完畢后斷頭,小心剝開顱骨取出全腦,取海馬所在的節(jié)段區(qū)放入固定液中4℃保存。NOS免疫組化測(cè)定采用SP法進(jìn)行,按照試劑盒要求步驟依次進(jìn)行,最后的標(biāo)本片在光鏡下(10×40)計(jì)數(shù)5個(gè)視野的桔黃色陽性細(xì)胞數(shù)量,計(jì)算出平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差,數(shù)據(jù)以-x±s表示,采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,P<0.05

7、表示差異有顯著性。 結(jié)果: (1)各組間體重、心率、微透析針置入并穩(wěn)定60min及L組開始出現(xiàn)驚厥波時(shí)(其他兩組于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn))兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)動(dòng)脈血?dú)庵笜?biāo)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (2)與S組相比,L組腦透析液中NO濃度顯著升高。與L組相比,7-NI組顯著降低,各組間比較有顯著差異。 (3)與S組相比,L組海馬CA1區(qū)nNOS陽性細(xì)胞數(shù)量顯著增多。與L組相比,7-NI組顯著減少,各組間比較有顯著差異。 (

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