一氧化氮在休克腸淋巴液致血管低反應性中的作用.pdf

1、背景:前期研究顯示，創(chuàng)傷、失血性休克引起血管對血管活性物質，如去多甲腎上素（norepinephrine，NE）、腎上腺素、多巴胺等的反應性下降，是患者死亡的重要原因之一。研究表明，一氧化氮(nitric oxide，NO)參與了失血性休克后血管低反應性的發(fā)生;失血性休克腸淋巴液回流是導致血管低反應性的重要因素，結扎腸系膜淋巴管或腸淋巴液引流均可提高失血性休克大鼠的血管反應性與鈣敏感性;NO是否與休克腸淋巴液介導血管低反應性的作用有關，

2、值得研究。
　　目的:在建立失血性休克大鼠模型的基礎上，觀察腸淋巴液引流對失血性休克大鼠腸系膜上動脈(superior mesenteric artery，SMA)血管組織NO及其下游分子環(huán)磷酸鳥苷(cyclic guanosine monophosphate，cGMP)、環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）含量以及磷酸化的蛋白激酶A(phosphorylation protein

3、kinase A，p-PKA)、p-PKG活性的影響;進一步采用離體血管張力測定技術，應用NO供體L-精氨酸（L-arginine，L-Arg）與一氧化氮合酶抑制劑L-硝基-精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester，L-NAME)，探討NO在休克腸淋巴液介導血管低反應性中的作用，以腸淋巴途徑為切入點，為休克血管低反應性的臨床干預提供實驗依據(jù)與理論參考。
　　方法:18只Wistar雄性大鼠隨機均

4、分為假手術組(Sham)、休克組(Shock)、休克腸淋巴液引流組(Shock+drainage);大鼠在戊巴比妥鈉全身麻醉后，行股部無菌手術，右股靜脈注射肝素鈉全身抗凝，右股動脈插管連接生物信號采集系統(tǒng)監(jiān)測平均動脈血壓(MAP);左側股動脈插管后連接注射器固定于抽注機上備放血用。待所有手術完成、穩(wěn)定30 min后，休克組與引流組大鼠經(jīng)左側股動脈勻速放血，10 min內(nèi)將MAP降至40 mmHg，復制失血性休克模型。Shock+drai

5、nage組大鼠行腸系膜淋巴管插管，分別于低血壓60 min起引流休克腸淋巴液至休克3h。假手術組大鼠進行相同的手術操作，但不放血。在休克低血壓3h或相應時間點，留取SMA，用于檢測NO及cAMP、cGMP含量以及p-PKA、p-PKG活性。
　　另18只大鼠按上述分組與實驗方法，進行相應的手術以及模型制備，在相應時間點，分離2級腸系膜動脈，應用肌動描記器(620M)觀察微血管對梯度NE收縮張力的反應性變化;同時，應用微血管壓力-直

6、徑測定系統(tǒng)(110P)觀察微血管對梯度NE收縮幅度的反應性變化。另外，shock組大鼠的血管環(huán)分別與NOS抑制劑L-NAME孵育、shock+drainage組大鼠的血管環(huán)與NO供體L-Arg孵育后，進行血管反應性測定。
　　結果:Shock組SMA血管組織NO、cAMP、cGMP、p-PKG的含量顯著高于、p-PKA顯著低于sham組;shock+drainage組SMA血管組織p-PKA含量顯著高于、NO、cAMP、cGMP、

7、p-PKG含量顯著低于shock組，且這些指標與sham組無顯著差異。
　　Shock組血管環(huán)在NE濃度為3×10-6 mol/L、1×10-5 mol/L、3×10-5 mol/L以及shock+drainage組血管環(huán)在NE濃度為3×10-6 mol/L時收縮張力的反應性顯著低于sham組，且shock+drainage組大鼠的血管環(huán)在NE濃度為1×10-5mol/L、3×10-5 mol/L時收縮張力的反應性顯著高于shoc

8、k組;L-NAME提高了shock組大鼠血管環(huán)在NE濃度為1×10-5 mol/L、3×10-5 mol/L時收縮張力的反應性，L-Arg降低了shock+drainage組大鼠的血管環(huán)在NE濃度為1×10-5mol/L、3×10-5 mol/L時收縮張力的反應性。同時，shock組血管環(huán)對梯度NE的Emax顯著低于sham組，shock+drainage組血管環(huán)對梯度NE的Emax顯著高于shock組、PD2顯著低于shock組;L-

9、NAME顯著提高了shock組Emax。
　　Shock組血管環(huán)收縮幅度對NE濃度為1×10-7 mol/L、3×10-7 mol/L、1×10-6 mol/L、3×10-6 mol/L、3×10-5 mol/L以及shock+drainage組血管環(huán)收縮幅度對NE濃度為1×10-7 mol/L、3×10-7 mol/L、1×10-6 mol/L時的反應性顯著低于sham組;shock+drainage組大鼠血管環(huán)的收縮幅度對NE

10、濃度為1×10-7 mol/L、3×10-7 mol/L時的反應性顯著高于shock組。同時可見，L-NAME提高了shock組大鼠血管環(huán)在NE濃度為3×10-7 mol/L時收縮幅度的反應性，L-Arg降低了shock+drainage組大鼠血管環(huán)在NE濃度為1×10-7mol/L、3×10-7 mol/L、1×10-6 mol/L時收縮幅度的反應性。
　　結論:NO參與了休克腸淋巴液介導的血管低反應性。研究結果為以休克腸淋巴液