桂附地黃方多糖質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)方法研究.pdf

1、多糖廣泛存在于自然界有機(jī)體中，是由十個(gè)以上單糖通過糖苷鍵連接而形成的大分子化合物，具有能量儲(chǔ)存、結(jié)構(gòu)支持、防御和抗原決定性等多方面的生物功能，有些多糖或其衍生物還有多種藥理活性。目前多糖廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健食品、化工等行業(yè)。對多糖的研究開始于上世紀(jì)五十年代，主要集中在多糖藥理活性和化學(xué)方面。而多糖質(zhì)量控制研究至今較少，并且手段單一，主要通過控制多糖含量和分子量分布來實(shí)現(xiàn)。這些方法由于自身的局限性和缺陷，無法對多糖實(shí)現(xiàn)有效的質(zhì)量控制。

2、 本課題組曾對多糖的指紋圖譜進(jìn)行了初步探索，嘗試了采用控制水解條件對多糖進(jìn)行部分酸水解，以HPLC方法檢測，獲得指紋圖譜，取得了有意義的結(jié)果。而對于一個(gè)由提取和初步純化得到的粗多糖部位，其單糖組成也會(huì)在一定程度上反映多糖的質(zhì)量特點(diǎn)。基于這樣的認(rèn)識(shí)，我們進(jìn)而提出“多糖水解-衍生化-HPLC指紋圖譜”的研究思路，建立多糖質(zhì)量控制的新方法。 本研究以桂附地黃方多糖作為研究對象，對其多糖部位進(jìn)行全水解，用1-苯基-3甲基-5-吡啶啉

3、酮(PMP)對全水解產(chǎn)物進(jìn)行衍生化，以HPLC法，在波長250nm處檢測衍生化產(chǎn)物，得到反映多糖的單糖組成信息的指紋圖譜。以標(biāo)準(zhǔn)單糖為對照，對獲得的指紋圖譜中的八個(gè)特征峰進(jìn)行了指認(rèn)，分別為甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、木糖和阿拉伯糖。 采用以上建立的方法，獲得了10個(gè)批號(hào)不同來源的桂附地黃丸多糖的指紋圖譜，并結(jié)合中藥相似度軟件和主成分分析法對圖譜進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，通過相似度計(jì)算，10批產(chǎn)品的相似度均

4、在0.99以上。而在主成分分析法的投影圖中，不同批次產(chǎn)品被聚為3類，顯示了每批產(chǎn)品的指紋圖譜中對總峰面積貢獻(xiàn)較大的單糖在量上存在著一定的差別。 為了進(jìn)一步驗(yàn)證方法的適用性，我們將缺味桂附地黃方、不同產(chǎn)地單味藥材組成的桂附地黃方與標(biāo)準(zhǔn)桂附地黃方多糖的指紋圖譜進(jìn)行了比較，并以相似度軟件和主成分分析軟件分析。結(jié)果顯示，熟地黃、山茱萸的缺失對指紋圖譜的影響較大，其他藥材的缺失則影響較小，而單味藥材由于產(chǎn)地不同對指紋圖譜的影響也各不相同。