GnRH類似物對(duì)In-R1-G9細(xì)胞胰高血糖素分泌的影響及其機(jī)制的初步探討.pdf

1、促性腺激素釋放激素（gonadotropin releasing hormone，GnRH）是下丘腦分泌的一種十肽化合物，它能與GnRH 受體（gonadorelin receptor，GnRHR）特異性結(jié)合，主要參與調(diào)節(jié)生殖系統(tǒng)的功能。GnRH 類似物是人工合成的九肽，基于對(duì)垂體GnRHR的作用將其分為激動(dòng)劑（GnRH agonist，GnRHa）與拮抗劑（GnRHantagonist，GnRHant），人工合成的GnRH 類似物與G

2、nRHR 有高度的親和力。
　　 In-R1-G9 細(xì)胞是從倉(cāng)鼠胰島中分離出來(lái)的胰高血糖素瘤細(xì)胞。為了研究GnRH 類似物是否能參與調(diào)節(jié)In-R1-G9 細(xì)胞中胰高血糖素的分泌，本實(shí)驗(yàn)首先用反轉(zhuǎn)錄PCR、Western blot 以及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)觀察GnRHR在In-R1-G9 細(xì)胞中是否有表達(dá)，然后用不同終濃度的GnRHa 或GnRHant處理In-R1-G9 細(xì)胞，通過(guò)熒光定量PCR、Western blot和放射免疫技

3、術(shù)對(duì)細(xì)胞表達(dá)的胰高血糖素進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，GnRHR在In-R1-G9 細(xì)胞中有表達(dá)，并定位在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中。在基因水平和蛋白水平上，低濃度的GnRHa（0.1 nM）使細(xì)胞中胰高血糖素的分泌有所升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而高濃度的GnRHa（10 nM和1000 nM）均能顯著的增強(qiáng)細(xì)胞中胰高血糖素的分泌，并呈劑量依賴性；低濃度的GnRHant（0.1 nM）使細(xì)胞中胰高血糖素的分泌有所下降，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而高濃度的GnRHant

4、（和10 nM和1000 nM）能顯著的抑制細(xì)胞中胰高血糖素的分泌，也呈劑量依賴性。
　　 GnRHR 屬G 蛋白偶聯(lián)的受體家族成員，GnRH在體內(nèi)的重要功能主要是通過(guò)GnRHR來(lái)介導(dǎo)的，GnRH與GnRHR 結(jié)合后能調(diào)節(jié)多條信號(hào)途徑，通常能激活MAPK 級(jí)聯(lián)反應(yīng)。為了研究ERK和P38 信號(hào)通路以及PKC 是否參與GnRH類似物調(diào)控In-R1-G9 細(xì)胞中胰高血糖素的分泌，本實(shí)驗(yàn)用Western blot 技術(shù)觀察了GnRH

5、類似物刺激細(xì)胞后，ERK和P38 磷酸化水平的變化情況，并用GF109203X（PKC的抑制劑）預(yù)處理細(xì)胞，觀察GnRH 類似物刺激In-R1-G9 細(xì)胞后胰高血糖素的分泌量。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，GnRHa 或GnRHant處理后，細(xì)胞中ERK和P38的磷酸化水平并沒(méi)有呈現(xiàn)明顯的升高或降低的趨勢(shì)；
　　 GF109203X 預(yù)處理細(xì)胞后，未影響GnRHa和GnRHant 增強(qiáng)或抑制細(xì)胞中胰高血糖素的分泌量。由此得出的結(jié)論是G

6、nRHR在In-R1-G9 細(xì)胞中有表達(dá)，并定位在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中。GnRH 類似物可參與調(diào)節(jié)In-R1-G9 細(xì)胞中胰高血糖素的分泌，一定濃度的GnRHa和GnRHant能增強(qiáng)或抑制In-R1-G9 細(xì)胞中胰高血糖素的分泌。
　　 GnRH對(duì)In-R1-G9 細(xì)胞的這種作用提示，GnRH具有潛在的調(diào)節(jié)血糖濃度的作用。
　　 但是，ERK、P38 信號(hào)通路和PKC 可能不參與GnRH 類似物對(duì)In-R1-G9 細(xì)胞中胰高