鹽脅迫下棉花幼苗的差異蛋白組學(xué)分析.pdf

1、棉花是世界上重要的經(jīng)濟(jì)作物，也是最主要的耐鹽農(nóng)作物之一，而土壤鹽漬化是影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)發(fā)展和生態(tài)環(huán)境改善的重要限制因子。植物的抗鹽性是由多個(gè)基因控制的一系列復(fù)雜的反應(yīng)機(jī)制。不同植物之間甚至同一亞系不同品種之間的植物，在鹽脅迫下的表現(xiàn)狀態(tài)和調(diào)節(jié)適應(yīng)機(jī)制都存在著區(qū)別。本研究以中棉所69為材料，分別從生理水平和蛋白質(zhì)水平分析了棉花幼苗根部對(duì)鹽脅迫的響應(yīng)，旨在探索棉花幼苗響應(yīng)鹽脅迫的分子機(jī)制，為鹽脅迫下棉花的特異蛋白以及相關(guān)基因功能的進(jìn)一步研究奠定

2、基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　1.考察了不同水平的鹽脅迫處理后棉花幼苗的形態(tài)學(xué)指標(biāo)。鹽脅迫下棉花萌發(fā)時(shí)期下胚軸發(fā)黃，生長(zhǎng)時(shí)期棉花幼苗葉片萎蔫，葉片邊緣出現(xiàn)黃色，子葉伸展不平，棉花幼苗主根變細(xì)長(zhǎng)，根系由乳白色逐漸變褐色。
　　2.對(duì)鹽脅迫下棉花幼苗進(jìn)行了相關(guān)生理生化分析。結(jié)果表明：鹽脅迫下棉花幼苗葉片中的葉綠素含量與超氧化物歧化酶（SOD）的活性以及根系活力隨鹽處理濃度的升高逐漸降低；脯氨酸的含量積累隨鹽處理濃度的增加呈持續(xù)上

3、升趨勢(shì)；過(guò)氧化物酶（POD）的活性差異不顯著。鹽濃度較低時(shí)，處理組的葉綠素含量與對(duì)照很接近，當(dāng)鹽濃度升高至1％時(shí)降低幅度較大；鹽濃度超過(guò)1%時(shí)SOD活性逐漸趨于穩(wěn)定。鹽濃度低于0.5%時(shí)，棉花幼苗根系活力降低幅度較小，高于1%時(shí)，下降幅度較大。
　　3.優(yōu)化了提蛋白方法，建立了基于管狀膠的棉花幼苗蛋白的雙向電泳（2D-PAGE）分離方法。采用液氮研磨與三氯乙酸-丙酮法結(jié)合提取葉蛋白，磷酸鹽緩沖液研磨與三氯乙酸-丙酮法結(jié)合提取根系蛋

4、白；選取7M尿素裂解液裂解蛋白，確定蛋白的最佳上樣量為300μg。
　　4．利用上述適合棉花幼苗的提蛋白方法與雙向電泳技術(shù)，對(duì)鹽脅迫處理的棉花幼苗根系蛋白進(jìn)行了雙向電泳分離，獲得了蛋白豐度較高、背景清晰、解析度高的差異蛋白表達(dá)圖譜。圖像用PDQuest8.0軟件解析表明：共成功匹配185個(gè)蛋白點(diǎn)，差異蛋白穩(wěn)定表達(dá)，鹽脅迫下棉花根系蛋白共有36個(gè)顯著差異蛋白點(diǎn)，其中有16個(gè)穩(wěn)定上調(diào)表達(dá)的蛋白點(diǎn)，有20個(gè)穩(wěn)定下調(diào)表達(dá)的蛋白點(diǎn)。