影響綿羊卵丘細(xì)胞核移植效果主要因素的研究.pdf

1、體細(xì)胞核移植技術(shù)對于動物育種、保種和瀕危動物保護(hù)以及發(fā)育生物學(xué)等基礎(chǔ)理論的研究均有重要意義。 所有的細(xì)胞擁有同一套基因組，它們都來源于受精卵，但表型卻不相同。這是通過表觀遺傳機(jī)制完成。已經(jīng)在許多物種中證明，通過體細(xì)胞核移植，成功的重編程可使分化的體細(xì)胞回到全能狀態(tài)。盡管多種體細(xì)胞核移植動物已經(jīng)誕生，但核移植效率很低。目前普遍認(rèn)為核移植動物胚胎基因組表觀重編程異常是核移植效率低的主要原因。 本研究主要探討了化學(xué)輔助去核時，

2、秋水仙胺的最佳濃度；二甲基亞砜(Dimethylsulfoxide；DMSO)和胎牛血清(Fetal Bovine Serum；FBS)對核移植胚胎體外發(fā)育的影響，以及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑——5-氮-2′-脫氧核苷對綿羊卵丘細(xì)胞核移植胚胎體外發(fā)育的影響。 研究發(fā)現(xiàn)用0.5μg/ml秋水仙胺處理綿羊卵母細(xì)胞0.5h，可使卵母細(xì)胞核區(qū)形成胞質(zhì)突起率最高(P<0.01): 化學(xué)激活液中DMSO的含量增加到1％或2％，卵裂率比

3、不添加組提高(P<0.01)，添加1％DMSO組囊胚率最高(P>0.05)； 在有糖的胚胎發(fā)育液中添加10％FBS，囊胚率極顯著提高(P<0.01)； 體細(xì)胞核移植胚胎的甲基化水平高于體內(nèi)正常受精的胚胎，分化的體細(xì)胞的甲基化水平高于精子和卵子。使用DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑——5-氮-2′-脫氧核苷(5-aza-2'-deoxycytidine；5-aza-dC)處理核供體細(xì)胞和核移植重構(gòu)胚胎，來降低它們的DNA甲基化水平

4、，可能會使核移植重構(gòu)胚的甲基化水平接近體內(nèi)正常受精胚胎水平，從而提高核移植效率。用不同濃度(0至0.02μM)5-氮-2-脫氧核苷處理綿羊卵丘細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)0.01μM 5-氮-2′-脫氧核苷處理組囊胚發(fā)育率極顯著高于其他處理組(P<0.01)；但各組間卵裂率和桑椹胚率差異不顯著(P>0.05)； 用不同濃度5-氮-2′-脫氧核苷處理綿羊核移植重構(gòu)胚胎，發(fā)現(xiàn)0.01μM 5-氮-2′-脫氧核苷處理組囊胚發(fā)育率極顯著高于其他處理組(P