雙黃連注射液對大鼠CYP的影響.pdf

1、細胞色素P450(cytochrome P-450,CYP)是一種混合功能氧化酶,可催化體內(nèi)多種反應,CYP酶參與體內(nèi)75％~80％的藥物代謝,清除臨床上所用65％~70％的藥物。奧美拉唑(Omeprazole,OPZ)是一種新型、高效、低毒的抗消化性潰瘍藥。研究表明,在人體內(nèi)奧美拉唑主要經(jīng)CYP系統(tǒng)代謝,生成10余種代謝產(chǎn)物。在大鼠體內(nèi),奧美拉唑主要經(jīng)過CYP1A1、CYP3A2和CYP2D1代謝,生成5-羥基奧美拉唑。本研究選擇奧美

2、拉唑作為參照,考查雙黃連注射液對大鼠CYP酶的影響。雙黃連注射液主要成分為金銀花、黃芩、連翹,為純中藥復方制劑,質(zhì)控成分為黃芩苷,主要用于外感風熱引起的發(fā)熱、咳嗽及多種上呼吸道感染病癥,已成為中醫(yī)藥治療呼吸道感染性疾病的首選藥物之一。
　　本課題主要研究雙黃連注射液及其質(zhì)控成分黃芩苷對CYP的影響,預測雙黃連注射液與其他藥物聯(lián)用時可能產(chǎn)生的代謝性藥物相互作用,為臨床合理用藥提供參考。
　　材料和方法:1.動物分組和給藥方案大

3、鼠隨機分成2組(雙黃連注射液給藥組與對照組),每組各9只,每天分別尾靜脈注射給予雙黃連注射液10.42mL·kg-1和同等劑量生理鹽水,連續(xù)給藥7天。2.肝微粒體制備及蛋白質(zhì)含量測定雙黃連注射液給藥組和對照組大鼠在末次給藥后,禁食24h以上(不限飲水),分別斷頭處死,立即取出肝臟,用鈣沉淀法制備肝微粒體,Bradford法測定微粒體蛋白濃度。3.肝微粒體體外溫孵系統(tǒng)肝微粒體體外溫孵系統(tǒng)的組成為:肝微粒體,NADPH,OPZ,磷酸鹽緩沖液

4、(pH7.4)。溫孵系統(tǒng)總體積為200μL。肝微粒體蛋白濃度為0.2mg·mL-1,NADPH的終濃度為1mmol·L-1,OPZ的終濃度為4μmol·L-1,用0.1mol·L-1磷酸鹽緩沖液(pH7.4)定容至終體積。37℃水浴中預孵5min后加入NADPH開始反應。4.樣品處理及色譜條件孵育20min后,加入200μl冰冷的乙腈,渦旋30s終止反應。12000rpm離心10min,取30μl上清液進樣分析。色譜條件:色譜柱5μm

5、DiamonsiL C18柱(4.6mm×200mm);流動相:甲醇:乙腈:0.1mol·L-1乙酸銨溶液=10:35:55(v:v:v);柱溫:25℃;流速:1.0mL·min-1;檢測波長:302nm。5.雙黃連注射液對大鼠肝微粒體CYP的體外影響實驗將不同體積雙黃連注射液加入到空白肝微粒體溫孵系統(tǒng)中,經(jīng)肝微粒體溫孵系統(tǒng)反應及樣品處理后,取30μl注入高效液相色譜儀進樣分析。以OPZ的轉(zhuǎn)化程度(Turnover,TR)作為酶活性的指

6、標,評價體外實驗中雙黃連注射液對大鼠CYP活性的影響。6.黃芩苷對大鼠肝微粒體CYP的體外影響實驗將不同濃度黃芩苷加入到空白肝微粒體溫孵系統(tǒng)中,經(jīng)系統(tǒng)反應及樣品處理后,取30μl注入高效液相色譜儀進樣分析。評估黃芩苷對CYP的影響,考察雙黃連注射液對CYP的影響與其質(zhì)控成分黃芩苷的關系。7.雙黃連注射液對大鼠肝微粒體CYP的體內(nèi)影響實驗HPLC法分別測定對照組和雙黃連注射液給藥組大鼠肝微粒體溫孵系統(tǒng)中OPZ的濃度,采用獨立樣本t檢驗分析

7、兩組酶活性的差異,P<0.05作為檢驗標準,評估體內(nèi)實驗中雙黃連注射液對CYP的影響。結(jié)果1.雙黃連注射液對大鼠肝微粒體CYP的體外影響實驗將雙黃連注射液加入到空白肝微粒體溫孵系統(tǒng)中,濃度分別為0、0.5、1、1.5、2、2.5、3.0μl·100μl-1時,TR值分別為:477.07±14.13、324.15±13.68、258.74±12.96、201.32±21.60、100.89±4.68、84.84±10.13、68.67±2

8、1.76pmol·minl-1·mg-1。結(jié)果表明,CYP的活性隨雙黃連注射液的濃度的升高而降低。IC50為0.96μl·100μl-1。2.黃芩苷對大鼠肝微粒體CYP體外影響實驗將黃芩苷加入到空白肝微粒體溫孵系統(tǒng)中,濃度分別為0、6、10、15、20、25、30、35mg·mL-1時,CYP的TR值分別為:419.47±27.52、298.89±9.20、279.55±16.09、211.21±10.91、163.31±63.54、1

9、15.71±19.56、102.29±22.24、21.81±3.50pmol·min-1·mg-1。
　　結(jié)果表明,CYP的活性隨黃芩苷的濃度的升高而降低。IC50為12.89μg·100μl-1。3.雙黃連注射液對大鼠肝微粒體CYP的體內(nèi)影響實驗用HPLC法測定對照組和給藥組大鼠肝微粒體溫孵系統(tǒng)中OPZ的含量。對照組和給藥組大鼠TR值分別是298.96±13.63 pmol·min-1·mg-1和204.73±23.62 pm