刺五加注射液、菌梔黃注射液對大鼠肝CYP3A的影響.pdf

1、中藥的進一步發(fā)展需要進行中藥現(xiàn)代化的研究，其中，中藥藥動學是一項重要內容。大多數(shù)中藥的體內過程目前還不清楚，在臨床應用上也缺乏科學依據(jù)，中西藥合用的過程中就很容易產生藥物相互作用。在藥物相互作用的發(fā)生率中，以代謝性相互作用發(fā)生率最高。
　　 細胞色素P450酶是體內藥物代謝的主要酶類，其中以CYP3A亞型的含量以及代謝的藥物最多，為CYP450系統(tǒng)中最重要的一類。CYP450酶的誘導和抑制是發(fā)生相互作用的重要因為。目前有關中藥對

2、CYP450的影響研究報道較少，且多集中在中藥提取物、中藥活性成分對CYP的影響，而有關臨床上中藥的主要應用方式中藥復方、中成藥對CYP的影響的研究較少，因此，研究中成藥、中藥復方對CYP450的影響具有很強的實用意義。
　　 本研究的前期結果表明，刺五加注射液和茵梔黃注射液對大鼠肝微粒體CYP3A有較強的抑制作用，因此本研究對二者進行了更深入的研究。
　　 研究目的:
　　 本研究采用體外實驗研究刺五加注射液和

3、茵梔黃注射液中主要活性成分對CYP3A的抑制作用，從而闡明二者對CYP3A的抑制作用，并采用體內試驗的方法研究刺五加注射液和茵梔黃注射液對CYP3A的特異性底物咪達唑侖的藥動學的影響，評價二者對CYP3A的體內影響作用，指導其臨床用藥。
　　 研究方法:
　　 1.刺五加注射液對CYP3A的影響
　　 1.1刺五加注射液中刺五加苷B、刺五加苷E、異秦皮啶的含量測定HPLC法測定刺五加注射液中刺五加苷B、刺五加苷E

4、、異秦皮啶的含量。
　　 1.2刺五加注射液及其組分刺五加苷B、刺五加苷E、異秦皮啶對CYP3A的體外抑制作用
　　 1.2.1大鼠肝微粒體的制備取肝臟采用鈣沉淀法制備大鼠肝微粒體。
　　 1.2.2微粒體蛋白的含量測定Bradfrod法測定微粒體蛋白含量。
　　 1.2.3孵育反應孵育體系總體積500μL，反應體系中包含NADPH，磷酸鹽緩沖液，EDTA，MgCl2和微粒體蛋白。反應在37℃水浴中進行，

5、預孵育5min，加入NADPH啟動反應。實驗分為對照組和實驗組進行，實驗組加入各成分，對照組加入等體積磷酸鹽緩沖液。
　　 1.2.4酶活性的測定HPLC法測定咪達唑侖的轉化程度。
　　 1.3刺五加注射液對大鼠體內咪達唑侖藥動學的影響大鼠隨機分為實驗組和對照組，實驗組每日靜脈注射刺五加注射液(40ml·kg-1)，對照組每日靜脈注射相同劑量的生理鹽水，連續(xù)給藥7d，末次給藥2h后，尾靜脈注射咪達唑侖注射液10mg·kg

6、-1，分別于給藥后2，5，8，11，15，25，35，45，60，90min采血0.5ml，肝素抗凝，離心分離血漿，HPLC法測定血漿中咪達唑侖的濃度。
　　 2.茵梔黃注射液對CYP3A的影響
　　 2.1茵梔黃注射液及其組分黃芩苷、梔子苷對大鼠CYP3A的體外抑制作用
　　 2.1.1大鼠肝微粒體的制備采用鈣沉淀法制備大鼠肝微粒體。
　　 2.1.2微粒體蛋白的含量測定Bradfrod法測定微粒體蛋白

7、含量。
　　 2.1.3孵育反應孵育體系總體積500μL，反應體系中包含NADPH，磷酸鹽緩沖液，EDTA，MgCl2和微粒體蛋白。反應在37℃水浴中進行，預孵育5min，加入NADPH啟動反應。實驗分為對照組和實驗組進行，實驗組加入各成分，對照組加入等體積磷酸鹽緩沖液。
　　 2.1.4酶活性的測定HPLC法測定咪達唑侖的轉化程度。
　　 2.2茵梔黃注射液連續(xù)給藥對大鼠CYP3A的抑制作用大鼠隨機分為實驗組和

8、對照組，實驗組每日靜脈注射茵梔黃注射液(40mg·kg-1)，對照組每日靜脈注射相同劑量的葡萄糖注射液，連續(xù)給藥7d，末次給藥后即刻處死大鼠取肝臟制備肝微粒體，體外測定實驗組和對照組大鼠咪達唑侖的轉化程度。
　　 2.3茵梔黃注射液對大鼠體內咪達唑侖藥動學的影響
　　 實驗采用自身對照，12只雄性SD大鼠連續(xù)尾靜脈注射10％葡萄糖注射液3d后，于末次給藥后即刻，單次快速靜脈注射咪達唑侖注射液10mg·kg-1，并于2，7

9、，15，30，50，70，100min采血0.5ml，離心分離血漿。
　　 首次采血3d后，12只大鼠尾靜脈注射茵梔黃注射液(40mg·kg-1)，連續(xù)給藥7d，末次給藥后靜脈注射咪達唑侖注射液10mg·kg-1，分別在給藥后上述時間點采血0.5ml，離心分離血漿。
　　 HPLC法測定大鼠單用咪達唑侖注射液組與合用茵梔黃注射液組咪達唑侖的血藥濃度。
　　 3.統(tǒng)計分析采用3P97藥動學軟件，計算咪達唑侖藥動學參

10、數(shù)。應用SPSS10.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，實驗組和對照組之間的比較采用獨立樣本t檢驗，咪達唑侖單用組及與茵梔黃注射液合用組咪達唑侖血藥濃度及藥動學參數(shù)比較采用配對t檢驗，P<0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 1.刺五加注射液對CYP3A的影響
　　 1.1刺五加注射液中刺五加苷B、刺五加苷E、異秦皮啶的含量測定
　　 兩批次刺五加注射液中刺五加苷B、刺五加苷E和異秦皮啶的含量分別為：0.19

11、2、0.108、0.0165mg·ml-1(080915);0.228、0.138、0.0266mg·ml-1(081011)。
　　 1.2體外實驗研究刺五加注射液中刺五加苷B、刺五加苷E、異秦皮啶對CYP3A的抑制作用刺五加注射液對CYP3A有抑制作用(P<0.001)，抑制率為33.78±1.57％；刺五加苷B(P=0.159)、刺五加苷E(P=0.290)、異秦皮啶(P=-0.317)和三成分合用組(P=0.134)對大

12、鼠CYP3A無顯著抑制作用。
　　 1.3刺五加注射液對咪達唑侖的藥動學的影響咪達唑侖靜脈注射后，在大鼠體內的藥代動力學符合二室模型。實驗組和對照組咪達唑侖血藥濃度和藥動學參數(shù)均無顯著性差異。
　　 2.茵梔黃注射液對CYP3A的影響
　　 2.1茵梔黃注射液及其組分黃芩苷、梔子苷對大鼠CYP3A的體外抑制作用茵梔黃注射液(P=0.002)、黃芩苷(P=0.01)、黃芩苷和梔子苷合用組(P=0.001)對CYP3

13、A有抑制作用，抑制率分別為(48.49±4.51)％、(57.41±10.08)％、(43.68±7.50)％；梔子苷(P=0.259)對CYP3A無顯著抑制作用。
　　 2.2茵梔黃注射液連續(xù)給藥對大鼠CYP3A的抑制作用連續(xù)靜脈注射茵梔黃注射液7d后，實驗組大鼠CYP3A酶活性顯著低于對照組(P=0.002)，探針藥物咪達唑侖的代謝減少了約(39.64±15.87)％。
　　 2.3茵梔黃注射液對大鼠體內咪達唑侖藥動

14、學的影響合用茵梔黃注射液后，咪達唑侖的血藥濃度較單用組有顯著提高，單用組與合用組咪達唑侖的主要藥動學參數(shù)AUC0→t值分別為160.28±44.45、357.46±153.02(μg·ml-1)·min，合用組較單用組有顯著提高(P<0.001)；CL值分別為0.059±0.016、0.028±0.012 mg·kg-1·min-1，合用組較單用組有顯著下降(P<0.001)；T1/2β分別為39.58±8.63、38.96±12.14

15、 min，二者相比沒有顯著變化(P=0.894)。
　　 結論：
　　 1.刺五加注射液可明顯抑制大鼠離體肝微粒體CYP3A活性，其抑制作用與刺五加苷B、刺五加苷E和異秦皮啶無關。
　　 2.刺五加注射液對CYP3A探針藥物咪達唑侖在大鼠體內的藥動學無明顯影響。
　　 3.茵梔黃注射液對大鼠離體肝CYP3A有明顯抑制作用，其作用與黃芩苷有關。
　　 4.茵梔黃注射液多次給藥對大鼠肝CYP3A有明顯