子宮平滑肌分娩發(fā)動相關(guān)差異基因表達譜的篩選及意義.pdf

1、目的：探討人類分娩發(fā)動時，不同臨產(chǎn)狀態(tài)及部位的子宮平滑肌組織差異基因表達譜的變化，篩選出分娩發(fā)動相關(guān)的差異表達基因；并對其中的差異表達基因在不同臨產(chǎn)狀態(tài)的子宮平滑肌中的基因表達及孕婦外周血中的蛋白表達水平進行驗證，探討其臨床意義。 方法：cDNA微陣列技術(shù)：30例健康孕婦(分為未臨產(chǎn)組、自然臨產(chǎn)組和縮宮素誘發(fā)臨產(chǎn)組，每組10例)，剖宮產(chǎn)術(shù)中活檢子宮體部與子宮下段平滑肌組織，分別提取組織總RNA、逆轉(zhuǎn)錄成cDNA、cy3／cy5分

2、別標記cDNA探針，與8064條人類全長cDNA微陣列雜交，用Array Vision、MIDAS等軟件分析雜交圖像和數(shù)據(jù)篩查，以比值大于2或小于-2的數(shù)據(jù)點為顯著性差異表達基因的篩選標準，通過http：／／www．ncbi．nlm．nih．gov、htqp：／／www．chgc．sh．cn等網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫查詢基因的功能，建立人類臨產(chǎn)時子宮體部比子宮下段、自然臨產(chǎn)子宮體部比未臨產(chǎn)子宮體部及縮宮素誘導(dǎo)臨產(chǎn)子宮體部比未臨產(chǎn)子宮體部平滑肌組織差異

3、基因表達譜。 半定量：RT-PCR實驗：從上述篩選出的差異表達基因譜中，選擇高豐度、有顯著差異表達的熱休克蛋白70KD家族1B(HSPAlB)和低豐度、無顯著差異表達的電壓依賴性鈣通道-L型α亞單位1C(CACNAlC)，對30例孕婦子宮平滑肌組織中的相對表達量，采用RT-PCR方法進行驗證。 免疫散射比濁法、酶聯(lián)免疫吸附實驗：從差異表達基因譜中，選擇無差異的C-反應(yīng)蛋白(CRP)和有差異的白介素-6(IL-6)基因表達

4、產(chǎn)物，對140例孕婦外周血中的蛋白表達變化，分別用免疫散射比濁法、酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)進行驗證。 結(jié)論： 1．分娩發(fā)動是多條基因參與的過程； 2．分娩發(fā)動時子宮體部與子宮下段平滑肌組織具有不同的基因變化及應(yīng)激機制，對子宮下段平滑肌組織的研究不能代替整個子宮在分娩啟動中的變化； 3．縮宮素誘發(fā)臨產(chǎn)的差異基因表達譜與自然臨產(chǎn)相似，過高表達的基因可能與病理損傷有關(guān)； 4．目前臨床使用的宮縮抑

5、制劑作用靶點或受體不在共同、顯著性差異表達的基因譜內(nèi)，有必要篩選新的靶點或受體，設(shè)計新型宮縮抑制劑，提高早產(chǎn)治療的效果； 5．對差異基因表達譜中變化幅度大，且存在部位或分娩狀態(tài)差異基因的進一步研究可能為臨床監(jiān)測、治療提供新的指標、新的途徑。 6．臨產(chǎn)前后子宮平滑肌中HSPAlB、CACNAlC表達與臨產(chǎn)有關(guān)；對高豐度表達的基因，選用RT-PCR實驗與芯片實驗均可獲理想的結(jié)果，而對低豐度表達的基INRT-PCR實驗較芯片實