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文檔簡介
1、植物病原線蟲造成的土傳植物病害對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)損失。根結(jié)線蟲病害頻繁為害世界范圍的蔬菜生產(chǎn),尤其是我國保護(hù)地最常出現(xiàn)的土傳植物病害。化學(xué)殺線劑已被廣泛的用于線蟲病害的治理,但化學(xué)殺線劑對土壤環(huán)境和人類健康的高毒性,已使得如溴甲烷等殺線劑已經(jīng)或即將限制其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用。采用生防真菌防治線蟲的生物防治方法符合可持續(xù)治理的觀念,正發(fā)展成為治理根結(jié)線蟲的不可或缺的方法。
為進(jìn)一步篩選高效寄生線蟲真菌和闡明其寄生線蟲卵的
2、機(jī)理,本研究從湖北省煙草南方根結(jié)線蟲卵分離到1株具高效生防潛力的菌株HBF1。形態(tài)學(xué)、rDNA-ITS和翻譯延長因子tef1-α序列分析鑒定該菌為長梗木霉菌Trichoderma longibrachiatum,該菌是1株可以產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶的南方根結(jié)線蟲卵寄生真菌,其對南方根結(jié)線蟲卵第10天寄生率為80.45%。分別采用NAG(N-乙酰葡聚糖胺)和pNP(對硝基苯酚)制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線測定HBF1菌株分泌的幾丁質(zhì)降解酶系和外切幾丁質(zhì)酶的活性,
3、這兩者幾丁質(zhì)酶的活性在接種后的第10天分別達(dá)到最大為30.12和24.88μmol/h/mL。
為明確具體功能基因在長梗木霉菌株防治根結(jié)線蟲病害中的重要作用,本文通過簡并引物設(shè)計(jì)和RACE技術(shù)克隆其幾丁質(zhì)酶基因,分析該基因序列及與其他幾丁質(zhì)酶的同源性。本研究首次從長梗木霉HBF1菌中克隆到1個(gè)幾丁質(zhì)酶基因TlChi46,該基因DNA全長1793bp,含3個(gè)內(nèi)含子和1個(gè)1272bp的開放閱讀框,編碼423個(gè)氨基酸,理論分子量45
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