南方根結(jié)線蟲(chóng)flp-16、flp-27、flp-31基因的克隆及其表達(dá)原位雜交分析.pdf

1、類似FMRF酰胺多肽(FMRFamide-likepeptide，F(xiàn)LP)在線蟲(chóng)中廣泛存在，對(duì)調(diào)節(jié)線蟲(chóng)運(yùn)動(dòng)、取食、感知環(huán)境、建立寄生行為具有重要作用，深入研究植物寄生線蟲(chóng)FLF的功能對(duì)線蟲(chóng)防治具有重要意義。本研究以南方根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyneincognita)2齡幼蟲(chóng)為研究材料，利用cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)的方法，克隆了南方根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyneincognita)FLP基因Mi-flp-16，Mi-flp-

2、27和Mi-flp-31，并利用原位雜交技術(shù)進(jìn)行基因定位，為探討flp基因的功能及其應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下： 1.克隆目的基因：利用生物信息學(xué)篩選靶標(biāo)基因的EST序列，以南方根結(jié)線蟲(chóng)2齡幼蟲(chóng)為研究對(duì)象，利用RACE法克隆了目的基因cDNA全長(zhǎng)序列，并進(jìn)行分析。3個(gè)基因全長(zhǎng)分別為690bp、429bp、358bP,開(kāi)放閱讀框分別為522bp、279bp、267bp。Mi-flp-16編碼174個(gè)氨基酸的蛋白，預(yù)測(cè)蛋白分子

3、量大約是20.7KDa，等電點(diǎn)9.45，GenBank登錄號(hào)為EU549831；Mi-flp-27編碼93個(gè)氨基酸的蛋白，預(yù)測(cè)蛋白分子量大約是10.5KDa，等電點(diǎn)9.80，GenBank登錄號(hào)為AW871675；Mi-flp-31編碼89個(gè)氨基酸的蛋白，預(yù)測(cè)蛋白分子量大約是10.3KDa，等電點(diǎn)9.51，GenBank登錄號(hào)為BM882182。3個(gè)flp基因編碼了5個(gè)FLPs，分別為Mi-FLP-16(x2AQTFVRF,GQTFVR

4、F),Mi-FLP-27(AKGSRMRF)，Mi-FLP-31(LYRPRGPPRF)。這三個(gè)基因都是在植物寄生線蟲(chóng)中第一報(bào)道全長(zhǎng)序列，并且基因Mi-flp-31，是在整個(gè)線蟲(chóng)門(mén)中第一次報(bào)道的全長(zhǎng)序列。 2.原位雜交確定基因表達(dá)位置：根據(jù)目的基因設(shè)計(jì)特異探針，利用原位雜交確定基因表達(dá)位置。結(jié)果顯示3個(gè)基因表達(dá)位點(diǎn)均在線蟲(chóng)的圍喉神經(jīng)環(huán)處。圍喉神經(jīng)環(huán)是線蟲(chóng)的神經(jīng)中樞，基因表達(dá)在此處，說(shuō)明這3個(gè)基因與線蟲(chóng)的神經(jīng)系統(tǒng)有著密切的關(guān)系。確