北沙參種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定及RAPD分子標(biāo)記鑒別的研究.pdf

1、北沙參為多年生草本植物，具有較高的營(yíng)養(yǎng)、保健及藥用價(jià)值。因其為異花授粉植物，野生與栽培群體中存在著豐富的遺傳變異，同時(shí)由于北沙參藥材長(zhǎng)期人工栽培，種子種苗提純、復(fù)壯工作滯后，變異退化，嚴(yán)重影響了道地藥材的質(zhì)量穩(wěn)定。目前北沙參的品種分類(lèi)研究仍限于形態(tài)學(xué)、解剖學(xué)的方法，有關(guān)北沙參在DNA水平上的分類(lèi)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以北沙參為材料，從制定種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、DNA提取、RAPD的反應(yīng)體系與PCR擴(kuò)增條件建立以及運(yùn)用RAPD技術(shù)對(duì)北沙參主要栽培

2、品種進(jìn)行系統(tǒng)聚類(lèi)分析，并進(jìn)行品種種類(lèi)的劃分和分子鑒別方面進(jìn)行了探討。
　　 1、本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察種子的外部形態(tài)特征，測(cè)定不同產(chǎn)地的北沙參種子凈度、千粒重、含水量、發(fā)芽率，并據(jù)此初步制定了北沙參種子的質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。
　　 2、本實(shí)驗(yàn)利用北沙參葉片DNA來(lái)進(jìn)行RAPD分析，共6個(gè)樣品。采用CTAB法從葉片中直接提取DNA，然后將其溶于TE緩沖液中，利用紫外分光光度計(jì)法和瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)提取樣品基因組DNA的濃度和純度。結(jié)果

3、表明:所提取的北沙參葉片基因組DNA濃度和純度都很高，無(wú)論在質(zhì)量上還是完整性上都符合RAPD分析的需要。
　　 3、本實(shí)驗(yàn)研究了RAPD的影響因素，從而確立了一套優(yōu)化的北沙參RAPD反應(yīng)體系和PCR擴(kuò)增條件，即模板DNA32ng/μl，隨機(jī)引物1.0μmol/L，dNTPs0.25mmol/L,Mg2+2.5mmol/L，Taq聚合酶1U。其熱力學(xué)參數(shù)為:94℃預(yù)變性3min，之后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)（94℃變性30s，36℃退火60