一種新型具抗菌作用的免疫活性肽及其抗菌機(jī)理.pdf

1、牛乳酪蛋白經(jīng)過適當(dāng)?shù)牡鞍酌负瓦m當(dāng)?shù)乃鈼l件水解后具有抗菌活性，經(jīng)過乙醇沉淀——透析——Sephadex G-25層析分離等程序獲得一種富含酪氨酸的多肽。一系列的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，這種多肽在體外表現(xiàn)出免疫刺激作用，并具有抗革蘭氏陰性和陽性菌等廣譜的抗菌作用。因其含有異常多的酪氨酸，故命名為富含酪氨酸的免疫活性多肽，縮寫為：Trpi。 對(duì)Trpi的氨基酸組分進(jìn)行了分析，結(jié)合蛋白酶切位點(diǎn)和富含酪氨酸的特點(diǎn)對(duì)其一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了推測(cè)，并進(jìn)行了x

2、2-檢驗(yàn)，結(jié)果證明了這種推斷的正確性。這種富含酪氨酸具抗菌作用的免疫活性肽對(duì)應(yīng)于κ-酪蛋白的11-63氨基酸殘基片段(κ-CNf11-63)，由53個(gè)氨基酸組成。數(shù)據(jù)庫查詢結(jié)果證明屬于一種新的免疫活性肽和抗微生物肽。對(duì)其理化特性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)其具有熱穩(wěn)定性、帶有較多的陽離子、等電點(diǎn)和乳鐵蛋白相似等特性。在此基礎(chǔ)上，對(duì)其抗菌機(jī)理進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，為進(jìn)一步開發(fā)為食品防腐劑、口服抗菌藥物或免疫增強(qiáng)功能性食品打下了理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本項(xiàng)研究

3、還對(duì)其水解和純化工藝進(jìn)行了優(yōu)化，獲得了適合于放大規(guī)模制備Trpi的工藝路線和參數(shù)。 研究結(jié)果顯示：用胰蛋白酶水解牛乳酪蛋白制備Trpi的水解條件是：牛乳酪蛋白先在80℃條件下溶解，進(jìn)行10min的適度熱變性，然后再在45℃，pH=8，底物濃度為9.0％，酶與底物比為1:120(U/mg)的條件下，酶解90min，所得Trpi抗菌活性最好。樹脂NKA-8對(duì)Trpi有較好的吸附和解吸附效果，在上柱濃度為0.6mg/mL，上柱液的pH

4、值為7.2，4倍樹脂床體積的50％乙醇以1.5BV/h的流速進(jìn)行洗脫即可基本將Trpi從NKA-8樹脂上解吸下來；經(jīng)等電聚焦電泳測(cè)定，Trpi的等電點(diǎn)為8.61。Trpi抗菌機(jī)制的初步研究結(jié)果為：Trpi有可能取代了細(xì)胞壁表面的鎂離子，然后與負(fù)電性的脂多糖(LPS)緊密結(jié)合或者中和細(xì)胞壁上某一區(qū)域的電荷，導(dǎo)致細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)變形，Trpi穿過細(xì)胞壁，然后在細(xì)胞膜上打孔，改變細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性而導(dǎo)致靶細(xì)胞死亡。此外，本課題還通過軟件The Sw