乳源抗菌-免疫調(diào)節(jié)融合肽原核表達及其抗菌活性初步研究.pdf

1、目的：原核表達乳鐵蛋白抗菌肽(LfcinB)與免疫調(diào)節(jié)肽(PGPIPN)融合肽(antimicrobial-immunomodulating fusion peptide，簡稱AIFP)，并初步研究其體外抗菌活性。 方法：分析LfcinB和PGPIPN的結(jié)構(gòu)，借助計算機和生命科學軟件(Insight II)，設計柔性連接臂(oooos)連接LfcinB與PGPIPN形成融合肽AIFP；采用重疊延伸PCR技術(shù)獲得AIFP基因片段

2、；并構(gòu)建到原核表達載體pGEX-KG中，挑選陽性重組子，經(jīng)限制性內(nèi)切酶鑒定后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌E.coli BL21:然后用IPTG誘導表達，通過SDS.PAGE及Western-blot方法鑒定表達的融合蛋白；用Glutathione Sepharose4B親和層析方法純化融合蛋白；凝血因子Xa(Factor Xa，簡稱FXa)酶切融合蛋白經(jīng)Tricine-SDS-PAGE鑒定得到融合肽AIFP；紙片瓊脂糖擴散法初步檢測融合肽AIFP抗菌

3、活性。 結(jié)果：經(jīng)DNA測序證實成功構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pGEX-KG-AIFP； SDS-PAGE及Western-blot分析顯示，GST融合蛋白在E.coli BL21中高效表達；經(jīng)GlutathioneSepharose 4B純化后，得到較純的GST-AIFP融合蛋白；融合蛋白經(jīng)FXa酶切、Tricine-SDS.PAGE證實得到融合肽AIFP；并初步證明該融合肽有體外抗細菌活性。 結(jié)論：通過原核表達得到融合肽AI