2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、目的：原核表達(dá)乳鐵蛋白抗菌肽(LfcinB)與免疫調(diào)節(jié)肽(PGPIPN)融合肽(antimicrobial-immunomodulating fusion peptide，簡(jiǎn)稱AIFP)，并初步研究其體外抗菌活性。 方法：分析LfcinB和PGPIPN的結(jié)構(gòu)，借助計(jì)算機(jī)和生命科學(xué)軟件(Insight II)，設(shè)計(jì)柔性連接臂(oooos)連接LfcinB與PGPIPN形成融合肽AIFP；采用重疊延伸PCR技術(shù)獲得AIFP基因片段

2、；并構(gòu)建到原核表達(dá)載體pGEX-KG中，挑選陽(yáng)性重組子，經(jīng)限制性內(nèi)切酶鑒定后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌E.coli BL21:然后用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，通過(guò)SDS.PAGE及Western-blot方法鑒定表達(dá)的融合蛋白；用Glutathione Sepharose4B親和層析方法純化融合蛋白；凝血因子X(jué)a(Factor Xa，簡(jiǎn)稱FXa)酶切融合蛋白經(jīng)Tricine-SDS-PAGE鑒定得到融合肽AIFP；紙片瓊脂糖擴(kuò)散法初步檢測(cè)融合肽AIFP抗菌

3、活性。 結(jié)果：經(jīng)DNA測(cè)序證實(shí)成功構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-KG-AIFP； SDS-PAGE及Western-blot分析顯示，GST融合蛋白在E.coli BL21中高效表達(dá)；經(jīng)GlutathioneSepharose 4B純化后，得到較純的GST-AIFP融合蛋白；融合蛋白經(jīng)FXa酶切、Tricine-SDS.PAGE證實(shí)得到融合肽AIFP；并初步證明該融合肽有體外抗細(xì)菌活性。 結(jié)論：通過(guò)原核表達(dá)得到融合肽AI

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