大Y染色體臨床效應(yīng)及其形成機(jī)理初步研究.pdf

1、染色體多態(tài)性是指人類群體中染色體形態(tài)存在的微小差異。傳統(tǒng)的遺傳學(xué)認(rèn)為，染色體多態(tài)性通常不具有明顯的表型或病理學(xué)意義。但越來越多的研究表明，染色體多態(tài)性可產(chǎn)生臨床效應(yīng)，與生殖異常有關(guān)，包括早期復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)、早期胚胎停止發(fā)育、胎兒畸形等。
　　 大Y染色體是常見的染色體多態(tài)性。據(jù)統(tǒng)計(jì)，大Y染色體在生殖異常的男性患者中的比例達(dá)2.18％-21.73％。隨著生殖輔助技術(shù)的日益發(fā)展，許多不孕不育的患者求助于體外受精.胚胎移植技術(shù)，其中不

2、乏有大Y患者。
　　 關(guān)于大Y的形成機(jī)理的研究較少。Yassmine對(duì)一例胎兒的產(chǎn)前診斷及出生后診斷均為Yqh+/Yqh-嵌合體，推測(cè)這種情況可能是來源于合子形成后DYZ區(qū)的缺失或者姐妹染色單體的不平等交換。由此推測(cè)大Y的形成可能與DYZ區(qū)相關(guān)。
　　 DYZ(human Y-chromosome specific repeated DNA family)是指人類Y染色體上特異性的重復(fù)序列，現(xiàn)在已經(jīng)確定的包括DYZ1、D

3、YZ2和DYZ3。其中DYZ1是Y染色體長臂遠(yuǎn)端的異染色質(zhì)中主要串聯(lián)重復(fù)序列，占Y染色體總長度的約40％。DYZ1長度為3.6kb，2000-4000次為其在正常男性人類的重復(fù)次數(shù)。
　　 Deepali等將暴露于射線的男性與復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(Rccurrent spontaneousabortion,RSA)患者丈夫的DYZI穩(wěn)定性進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)后者的不穩(wěn)定性更加常見，推測(cè)DYZ1在Y染色體的折疊和結(jié)構(gòu)完整性方面有關(guān)鍵作用。

4、r>　　 基于以上研究背景，本研究首先通過回顧性臨床研究來探討大Y染色體對(duì)體外受精-胚胎移植結(jié)局的影響。然后，通過對(duì)Y染色體上DYZ1完整性及拷貝數(shù)檢測(cè)研究其在Y染色體多態(tài)性患者和早期復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者丈夫中的變化，以期探討DYZ1在Y染色體多態(tài)性和早期復(fù)發(fā)性流產(chǎn)所起的作用。
　　 第一部分：大Y染色體對(duì)體外受精-胚胎移植結(jié)局的影響
　　 【目的】通過回顧性研究探討大Y染色體對(duì)體外受精-胚胎移植結(jié)局的影響。
　　

5、【方法】選取2006年1月至2008年12月在山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心完成的體外受精-新鮮胚胎移植周期。其中，男方染色體G顯帶為大Y(Y≥18號(hào)染色體)且其妻排除已知的影響體外受精-胚胎移植結(jié)果的疾病的治療周期為大Y組（33例患者，47個(gè)治療周期），同期在本中心進(jìn)行體外受精-鮮胚移植治療的其他治療周期為群體對(duì)照組（共6620個(gè)治療周期）。
　　 【結(jié)果】大Y組與群體對(duì)照組比較，其受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、種植率、妊娠率

6、、早期流產(chǎn)率等各項(xiàng)指標(biāo)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05），但在畸形率、出生性別比例方面，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，即大Y組畸形兒出生與出生女孩所占比例有明顯升高。
　　 【結(jié)論】大Y染色體對(duì)體外受精-胚胎移植的胚胎發(fā)育及近期妊娠結(jié)果均無顯著性影響，但在大Y染色體患者的妻子行體外受精-胚胎移植時(shí)，女孩更易出生。
　　 第二部分：DYZ1穩(wěn)定性在Y染色體多態(tài)性和早期復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中的研究
　　 【目的】

7、通過對(duì)DYZ1完整性及拷貝數(shù)檢測(cè)，探討DYZI在Y染色體多態(tài)性和早期復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中所起的作用。
　　 【方法】對(duì)同期就診于本中心的男性的DYZI進(jìn)行研究。其中，不明原因早期RSA患者丈夫106例；Y染色體多態(tài)性患者86例，包括大Y患者（Y≥18號(hào)染色體）79例和小Y患者（Y≤21號(hào)染色體）7例，同期就診的已正常生育并排除染色體異常的男性100例。
　　 【結(jié)果】通過PCR電泳，在RSA患者丈夫中1例存在DYZ1頭部的266

8、個(gè)堿基（第25-290個(gè)堿基）缺失，2例存在DYZ1中部的773個(gè)堿基缺失（第1347-2119堿基）；在小Y患者中2例存在DYZ1頭部的266個(gè)堿基（第25-290個(gè)堿基）缺失，4例存在中部的773個(gè)堿基缺失（第1347-2119堿基）和尾部的275個(gè)基因缺失（第3128-3420堿基）；在大Y患者和正常生育者中未發(fā)現(xiàn)DYZ1部分缺失。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR，正常生育男性的DYZI拷貝數(shù)平均為3900:大Y患者的平均值為5571，與正

9、常生育者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.007)，即大Y患者DYZ1拷貝數(shù)比正常生育男性多；小Y患者的平均值為1059，與正常生育者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，即小Y患者DYZ1拷貝數(shù)比正常生育男性少；RSA患者丈夫的平均值為2655，與正常生育者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，即RSA患者丈夫DYZ1拷貝數(shù)比正常生育男性少。
　　 【結(jié)論】DYZ1拷貝數(shù)增多可使顯微鏡下可視的Y染色體長度增加；DYZ1部分缺失