新城疫病毒的分離鑒定和免疫組化法檢測的研究.pdf

1、新城疫(Newcastle disease, ND)是雞的一種高度接觸性、毀滅性的傳染病,給我國的養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,因此被國際獸醫(yī)局(Office International desEpizooties, OIE)列為必須通報(bào)的傳染病之一。在安徽地區(qū)隨著疫苗的廣泛應(yīng)用,ND大規(guī)模爆發(fā)流行己受到明顯控制,但由于疫苗質(zhì)量、使用方法、免疫程序等問題,導(dǎo)致了非典型ND的廣泛發(fā)生；而新城疫病毒(Newcastle disease viru

2、s, NDV)宿主范圍的不斷擴(kuò)大和變異毒株的出現(xiàn)和流行,都使ND的防制和診斷工作更加復(fù)雜,引起社會(huì)各行對NDV檢測和防治高度重視。 首先,從臨床上收集到的具有典型和非典型ND臨床癥狀的病料組織20份,組織為腦。采用SPF雞胚分離、純化病毒,用HA與HI進(jìn)行病毒尿囊液的初步鑒定。結(jié)果鑒定出三株新城疫病毒,分別命名為NDV-AH1、NDV-AH2、NDV-AH3。 其次,利用NDV-AH1、NDV-AH2、NDV-AH3制備

3、成免疫原,免疫7日齡的非免疫雛雞,免疫3次后采血,分離血清,用微量法在同一個(gè)條件下用不同的分離毒株和Lasota疫苗株做為抗原做交互血凝抑制試驗(yàn),測定免疫血清的HI抗體滴度,檢測這三株分離毒分別與Lasota疫苗株抗原相關(guān)性,計(jì)算出R值比較其抗原相關(guān)性的差異。結(jié)果表明：三個(gè)毒株的R值為:NDV-AH1毒株與Lasota株兩者間的抗原性差異R=0.90,NDV-AH2與Lasota兩毒株間的抗原性差異R=0.95,NDV-AH3與Laso

4、ta兩毒株間的抗原性差異R=0.91。當(dāng)R值在0.67≤R≤1.5之間,說明分離毒株與Lasota毒株抗原性無明顯差異。由此可知NDV-AH1、NDV-AH2、NDV-AH3與Lasota疫苗株之間抗原性無明顯差異。為以后這些地區(qū)接種ND疫苗提供試驗(yàn)依據(jù)。 再者,試驗(yàn)還建立了F48E9強(qiáng)毒株感染的PCEF細(xì)胞,觀察細(xì)胞病變,用病變細(xì)胞進(jìn)行免疫組化檢測一抗和二抗最適試驗(yàn)濃度條件的優(yōu)化,經(jīng)過優(yōu)化試驗(yàn)得出,一抗以1: 10倍稀釋,37

5、℃孵化1h,酶標(biāo)二抗以1: 400稀釋時(shí),孵育時(shí)間為37℃,40min,染色效果達(dá)到最佳狀態(tài),具有染色效果好,背景清晰的優(yōu)點(diǎn)。 最后,進(jìn)一步用所建立免疫組化的方法來檢測F48E9強(qiáng)毒株和NDV-AH1毒株分別人工感染7日齡的非免疫雛雞,取感染后3-4天的雞全部撲殺,采集腦,肺,肝臟,脾臟,胰臟,十二指腸,氣管來觀察這些組織中的F48E9病毒和NDV-AH1毒株分布情況,以了解兩株ND病毒感染動(dòng)物時(shí),病毒在體內(nèi)各個(gè)組織中的分布情況