鴿新城疫病毒分離鑒定與油乳劑滅活疫苗研制.pdf

1、隨著養(yǎng)鴿業(yè)向規(guī)?；?、集約化方向發(fā)展，鴿的疾病不斷出現(xiàn)，其中以鴿新城疫最為嚴(yán)重和普遍。鴿新城疫(Pigeon Newcastle Disease)，俗稱(chēng)鴿瘟，是由鴿1型副粘病毒(PPMV-1)引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。鴿群常突然發(fā)病，迅速蔓延，其臨床癥狀主要表現(xiàn)為出血、腹瀉和神經(jīng)癥狀，尤以嗜神經(jīng)速發(fā)型為多見(jiàn)，發(fā)病率和死亡率都很高，感染鴿死亡率達(dá)30％～60％，嚴(yán)重的可達(dá)80％以上，對(duì)養(yǎng)鴿業(yè)造成巨大威脅。該病不僅給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)了

2、重大損失，同時(shí)給我國(guó)的禽產(chǎn)品出口造成了影響。自上世紀(jì)八十年代以來(lái)，由于疫苗的廣泛使用，新城疫已由過(guò)去大面積的爆發(fā)轉(zhuǎn)變?yōu)榱阈巧l(fā)，臨床癥狀也由過(guò)去的典型變成非典型。由于鴿1型副粘病毒對(duì)鴿有很強(qiáng)的致病性，單純使用雞新城疫疫苗不能產(chǎn)生完全有效的免疫保護(hù)，免疫過(guò)雞新城疫疫苗的鴿場(chǎng)仍有鴿新城疫發(fā)生的報(bào)道。本研究通過(guò)對(duì)自己分離的鴿新城疫JSG分離株的系列生物學(xué)特性、血清學(xué)特性研究，在研究結(jié)果的基礎(chǔ)上開(kāi)展了油乳劑滅活疫苗的研制，以期為有效預(yù)防和控制鴿

3、新城疫作出貢獻(xiàn)。
　　 本研究從南京六合某養(yǎng)鴿場(chǎng)疑似鴿新城疫的鴿群中，采集具有典型新城疫癥狀和病理變化的病死鴿腦組織，分離到一株病毒，命名為JSG株。對(duì)其進(jìn)行了SPF雞胚接種試驗(yàn)，分離株HA及抗NDV血清HI試驗(yàn)，MDT、ICPI和IVPI、ELD50，回歸健康鴿試驗(yàn)及負(fù)染透射電鏡形態(tài)學(xué)觀察等毒力學(xué)指標(biāo)測(cè)定及部分理化特性的試驗(yàn)。結(jié)果表明：該分離株電鏡下呈球形，有囊膜，大小不一，但直徑大多為200 nm左右，似副粘病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)；

4、回歸試驗(yàn)鴿出現(xiàn)典型的鴿新城疫臨床癥狀和病理變化；病死鴿的腦組織及回歸病死鴿腦組織接種10日齡SPF雞胚后，于40～56小時(shí)內(nèi)死亡，死亡胚尿囊液血凝價(jià)達(dá)6log2，死亡胚體血凝價(jià)達(dá)5log2，能被NDVLasota株陽(yáng)性血清中和，HI效價(jià)為8log2；MDT為80h、ICPI為1.225、IVPI為0.43、ELD50為10-7.66(0.1ml)；分離株對(duì)56℃水浴、4.8％的氯仿、pH3均較敏感。證明該分離株為鴿新城疫病毒毒株。為將該

5、分離毒株制備成油乳劑滅活疫苗，我們進(jìn)行了分離毒株抗原液的制備、抗原滅活條件的試驗(yàn)、疫苗乳化工藝的研究、疫苗安全性的檢驗(yàn)及不同免疫途徑的免疫效果試驗(yàn)、不同免疫劑量的免疫原性試驗(yàn)、疫苗免疫保護(hù)試驗(yàn)、與商品化的雞新城疫油乳劑滅活疫苗免疫效力對(duì)比試驗(yàn)及區(qū)域擴(kuò)大試驗(yàn)等，結(jié)果表明：將鴿新城疫病毒JSG株雞胚毒以1:10000倍稀釋?zhuān)臃N于9～10日齡雞胚尿囊腔，0.1ml/胚，收集24～96h內(nèi)死亡胚的尿囊液，其HA為7log2；加入0.1％濃度的

6、甲醛溶液在37℃條件下作用24小時(shí)可徹底將病毒滅活；將4％的吐溫-80均勻加入抗原液制備成水相，將6％的司本-80加入MARCOL-52醫(yī)用白油充分混合后經(jīng)121℃滅菌30分鐘制備成油相，將水相和油相按照1:3的比例在無(wú)菌條件下均勻乳化，制成的疫苗為油包水型白色乳狀液，穩(wěn)定性和粘度均符合國(guó)家生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求；疫苗通過(guò)培養(yǎng)基培養(yǎng)無(wú)菌，單劑量重復(fù)接種和雙劑量一次接種均安全，無(wú)不良反應(yīng)；通過(guò)頸背部皮下注射的途徑接種疫苗產(chǎn)生的抗體水平略高于

7、胸部肌肉注射途徑接種產(chǎn)生的抗體水平，且操作方便易于吸收；頸背部皮下注射0.5ml/羽即可產(chǎn)生較好的抗體水平；疫苗免疫后3周用強(qiáng)毒攻毒，其保護(hù)率為100％；鴿新城疫油乳劑滅活疫苗扣商品化的雞新城疫油乳劑滅活疫苗免疫非免鴿，其HI抗體沒(méi)有明顯差異，但免疫后21d用鴿新城疫病毒(JSG株)攻毒，鴿新城疫油乳劑滅活疫苗的保護(hù)率為100％(10/10)，雞新城疫油乳劑滅活疫苗保護(hù)率為80％(8/10)，表明鴿新城疫油乳劑滅活疫苗比雞新城疫油乳劑滅