基因多態(tài)性對(duì)中國(guó)肝移植受體預(yù)后的影響.pdf

1、普樂可復(fù)(FK506,Tacrolimus)是一種新型的鈣調(diào)磷酸酶(Calcineufin)抑制劑,臨床研究已證實(shí)其在預(yù)防實(shí)體器官移植后急性排斥反應(yīng)的發(fā)生中有卓越的效果,但是有效治療劑量范圍較窄和藥物體內(nèi)動(dòng)力學(xué)變化大是限制其最大限度發(fā)揮療效的障礙.近來的研究都紛紛把研究重點(diǎn)放在了造成鈣調(diào)蛋白抑制劑個(gè)體間效果差異上來. 已有研究證明,P-糖蛋白(PGP1)的生物活性對(duì)藥物的個(gè)體間差異有明顯的影響.PGPl是MDRl基因的編碼產(chǎn)物,其作為一

2、種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白可以將其作用底物從細(xì)胞膜的胞漿面泵出至細(xì)胞外,這些底物包括多種內(nèi)源性代謝產(chǎn)物以及各種藥物,而普樂可復(fù)就是其底物之一.PGP1主要分布于肝臟、腎臟以及小腸中,小腸中的PGP1主要位于成熟腸粘膜的凸向腸腔的頂端,其通過將外源性物質(zhì)主動(dòng)從細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)至腸腔來減少腸道對(duì)這些物質(zhì)的吸收. 有研究證明,造成鈣調(diào)蛋白抑制劑藥物動(dòng)力學(xué)的個(gè)體間差異的主要原因在于PGP1的蛋白活性的個(gè)體間不同.而MDR1基因(ABCBl)第3435位點(diǎn)(第

3、26外顯子內(nèi))的核苷酸由C突變?yōu)門將明顯降低PGP1蛋白的表達(dá).由此推測(cè)這種單核苷酸多態(tài)性可能解釋了造成普樂可復(fù)個(gè)體間藥動(dòng)學(xué)存在較大差異的部分原因,也可能影響了此類藥物口服后的吸收. [目的] 探討肝移植供受體多藥耐藥基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)(ABCB1)3435位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)受體服用普樂可復(fù)(FK506,Tacrolimus)劑量和血藥濃度個(gè)體差異間的關(guān)系. [方

4、法] 選擇2004年7月至2005年3月在我院接受原位肝移植術(shù)患者50例,監(jiān)測(cè)口服普樂可復(fù)肝移植受體的體重、服藥劑量、全血藥谷濃度,在服藥后1周、2周和1月設(shè)置統(tǒng)計(jì)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn).取供體和受體外周血、病肝或脾臟標(biāo)本,提取基因組DNA,PCR擴(kuò)增MDRl基因,用限制性位點(diǎn)多態(tài)性分析(Resection site Polymorhism,RSP)的方法檢測(cè)供受體MDR1第3435位Cff基因型,同時(shí)用DNA直接測(cè)序法檢測(cè)MDR1 343

5、5位點(diǎn)基因型,驗(yàn)證PCR-限制性位點(diǎn)多態(tài)性分析結(jié)果.計(jì)算每日每公斤體重的FK506用量、血藥濃度與每日每公斤體重的FK506用量的比值,以此對(duì)供受體MDR1基因型與受體用藥間的關(guān)系進(jìn)行分析. [結(jié)果] 在50例受體中,MDR1基因第3435位點(diǎn)CC基因型、CT基因型和TT基因型各有8例(16﹪)、35例(70﹪)和7例(14﹪).50例供體中有CC型15(30﹪)例,CT型29(58﹪)例,TT型6(12﹪)例.供受體.

6、MDR1基因型17例不符,而供受體基因型構(gòu)成比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05).在本研究所觀察的100例人群中,MDR1第3435位點(diǎn)CC型、CI、型和TT型各占23﹪、64﹪和13﹪.為維持受體術(shù)后的目標(biāo)血藥濃度水平,其服用FK506的劑量存在較大的個(gè)體間差異,肝移植受體在服用FK5061周、2周和1月時(shí),FK506口服用藥劑量分別為0.014～0.175mg/kg/d、0.017～0.182mg/kg/d、0.022～0.179mg/k

7、g/d.MDR1CC基因型受體在術(shù)后1周、2周和1月時(shí),每日每公斤體重的FK506用量均明顯高于CT和,TT基因型受體,前者血藥谷濃度與每日每公斤體重的FK506用量. [結(jié)論] 1.肝移植術(shù)后要維持一定的血藥濃度,FK506口服需藥劑量在個(gè)體之間存在極大差異. 2.個(gè)體之間FK506口服需藥量的這種差異與其MDR1的遺傳多態(tài)性密切相關(guān). 3.受體MDRl基因的單核苷酸多態(tài)性(Single nucleot

8、ide polymorphism,SNP)較供體對(duì)這種差異的影響更大.檢測(cè)受體的MDRl基因多態(tài)性對(duì)預(yù)測(cè)個(gè)體的FK506給藥劑量有參考意義. 這部分研究的內(nèi)容已經(jīng)以論著的形式發(fā)表于《Liver Transplantation》(SCI收錄,影響因子:4.447).隨著免疫抑制治療及預(yù)防原發(fā)病復(fù)發(fā)治療的方案不斷發(fā)展,近十年來肝移植存活率及術(shù)后生存率得到明顯提高.但是,術(shù)后移植物失功仍較常見,文獻(xiàn)報(bào)道第一年出現(xiàn)移植肝失功的比例大約為

9、13﹪,而五年內(nèi)達(dá)到35﹪.而出現(xiàn)這種情況最主要的兩種原因仍然是免疫相關(guān)的移植物急、慢性排斥反應(yīng)及肝臟原發(fā)疾病(在中國(guó)主要為乙型肝炎和肝癌)的復(fù)發(fā).免疫反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展與人體內(nèi)環(huán)境的改變密切相關(guān),而免疫活性細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子決定了內(nèi)環(huán)境的進(jìn)一步發(fā)展.細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)在患者移植后的免疫環(huán)境中起了很大的作用,所以它們與移植后排斥反應(yīng)的發(fā)生及原發(fā)病的復(fù)發(fā)等并發(fā)癥息息相關(guān). 細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中起了很大的作用,而且其表達(dá)量的輕

10、微改變是乎就可以導(dǎo)致不同的反應(yīng)結(jié)果.細(xì)胞因子的產(chǎn)量主要由基因控制,而其基因型在遺傳上存在多態(tài)性,所以其合成量及水平存在很大的個(gè)體差異.例如,有研究顯示TNF-α在啟動(dòng)子位置-308位點(diǎn)稀有堿基(G>A)的出現(xiàn)可以影響其轉(zhuǎn)錄水平增加6至7倍.然而,IL-10-1082位G到A的突變會(huì)減少IL-10的產(chǎn)量.人體內(nèi)的各種免疫反應(yīng)或者排斥反應(yīng)的發(fā)生肯定受到個(gè)人由于基因多態(tài)性造成的細(xì)胞因子產(chǎn)物量不同影響.目前有很多中心報(bào)道了關(guān)于細(xì)胞因子多態(tài)性與肝

11、移植后急性排斥反應(yīng)的關(guān)系,但是結(jié)果很不一致,而且此些研究主要集中高加索人種. 國(guó)外有研究報(bào)道TNF-α、IL-10等細(xì)胞因子基因多態(tài)性與肝移植后丙肝復(fù)發(fā)相關(guān),但未見與乙肝復(fù)發(fā)關(guān)系的研究報(bào)道. 明確細(xì)胞因子基因多態(tài)性與肝移植后急性排斥反應(yīng)和乙肝復(fù)發(fā)的關(guān)系,可制定免疫抑制劑及預(yù)防乙肝復(fù)發(fā)治療的個(gè)體化用藥方案.為此,本研究欲檢測(cè)國(guó)外研究比較熱,爭(zhēng)議也比較多的三個(gè)細(xì)胞因子,TNF-α,IL-10,和TGF-β1的基因多態(tài)性,明確

12、其與中國(guó)肝移植患者預(yù)后的關(guān)系. [目的] 本研究通過檢測(cè)因乙肝相關(guān)性肝病行肝移植患者的FCGR3A基因多態(tài)性,研究其人群分布特點(diǎn),并分析其對(duì)HBIG臨床應(yīng)用效果的影響,探索FCGR3A基因多態(tài)性T/G與肝移植患者預(yù)后的關(guān)系,為更好地指導(dǎo)臨床用藥及判斷預(yù)后提供參考. [方法] 隨訪浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院肝移植中心2004年1月至2005年11月間術(shù)前診斷為乙肝相關(guān)性肝病(暴發(fā)性肝炎,急慢性重癥肝炎,乙肝肝硬化

13、,乙肝后肝癌等)施行肝移植,術(shù)后使用HBIG預(yù)防乙肝復(fù)發(fā)治療,且存活時(shí)間大于1年的患者共77例.提取入選患者的DNA,經(jīng)PCR擴(kuò)增后采用ABI公司的BigDye3.1試劑盒對(duì)77例患者的FCGR3A基因型進(jìn)行測(cè)序,用Polyphred分析其559核苷酸位點(diǎn)(T/G)的單核苷酸多態(tài)性,x<'2>(卡方)檢驗(yàn)比較在乙肝復(fù)發(fā)組及無復(fù)發(fā)組中的基因型頻率,Kaplan-Meier法檢驗(yàn)比較基因型不同組間乙肝無復(fù)發(fā)累計(jì)生存率,進(jìn)而分析FCGR3A基

14、因第559位單核苷酸多態(tài)性與乙肝復(fù)發(fā)的關(guān)系.P<0.05認(rèn)為差異統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義. [結(jié)果] 本組77例肝移植受體(其中男性70例,女性7例),平均年齡45.2±8.1歲,平均隨訪時(shí)間623±169天(360-996天),乙肝復(fù)發(fā)16例.術(shù)后乙肝1年和2年復(fù)發(fā)率分別為14.3﹪和18.2﹪,復(fù)發(fā)時(shí)間從4天到627天(中位復(fù)發(fā)時(shí)間231天).基因測(cè)序發(fā)現(xiàn)FCGR3A基因型TT 35例(45.4﹪),TG 31例(40.

15、3﹪),GG 11例(14.3﹪).559G基因攜帶組(基因型為TG或GG)42例(54.5﹪),乙肝復(fù)發(fā)率為9.5﹪,1年和2年無復(fù)發(fā)累計(jì)生存率分別為95.2﹪和88.7﹪;559G基因未攜帶組(基因型為TT)35例(45.5﹪),乙肝復(fù)發(fā)率為28.6﹪,1年和2年無復(fù)發(fā)累計(jì)生存率分別為74.3﹪和69.3﹪.)c2檢驗(yàn)示559G基因攜帶組和未攜帶組之間乙肝復(fù)發(fā)率有顯著性差異(P<0.05),Kaplan-Meier檢驗(yàn)示兩組肝移植術(shù)