骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7在前列腺癌中的表達(dá)及pGPU6-GEP-Neo-BMP7-shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、目的:
　　 1.觀察人前列腺癌細(xì)胞PC-3、乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、腎癌細(xì)胞ketr-3、胃癌細(xì)胞MGC-803、膀胱癌細(xì)胞T24及人前列腺癌(Pca)組織標(biāo)本中骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)的表達(dá)情況,探討前列腺癌中BMP-7的表達(dá)水平與前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的關(guān)系。
　　 2.為進(jìn)一步研究以BMP-7為靶基因在前列腺癌的治療作用,我們進(jìn)行了pGPU6/GFP/Neo-BMP7-shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定。

2、r>　　 方法:
　　 1.體外分別培養(yǎng)人前列腺癌細(xì)胞PC-3、乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、腎癌細(xì)胞ketr-3、膀胱癌細(xì)胞T24、胃癌細(xì)胞MGC-803,采用總RNA提取和RT-PCR兩步法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中BMP-7 mRNA的表達(dá)及表達(dá)水平。
　　 2.收集2004年1月～2008年6月徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院術(shù)后經(jīng)HE染色符合診斷的前列腺癌組織石蠟包埋切片共87例,其中前列腺癌無骨轉(zhuǎn)移42例,前列腺癌伴骨轉(zhuǎn)移45例,

3、以前列腺增生組織標(biāo)本30例為對(duì)照,采用免疫組織化學(xué)PowerVision(PV)二步法檢測(cè)組織標(biāo)本中BMP-7的表達(dá)及表達(dá)水平(光密度值),用PBS替代一抗作陰性對(duì)照。
　　 3.自行設(shè)計(jì)針對(duì)BMP-7的shRNAs轉(zhuǎn)錄模板DNA,將其插入載體pGPU6/GFP/Neo,構(gòu)建針對(duì)BMP-7的pGPU6/GFP/Neo-BMP7-shRNA真核表達(dá)質(zhì)粒載體。
　　 結(jié)果:
　　 1.RT-PCR結(jié)果顯示:BMP-7

4、在實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤細(xì)胞中都有表達(dá),BMP-7 mRNA相對(duì)表達(dá)的光密度均值在前列腺癌細(xì)胞PC-3中表達(dá)最高,為9.585×10-1±1.668×10-2,在乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中表達(dá)水平僅次之,為9.497×10-1±3.886×10-2,兩者差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;BMP-7 mRNA表達(dá)的光密度均值在胃癌細(xì)胞MGC-803、膀胱癌細(xì)胞T24、腎癌細(xì)胞ketr-3中表達(dá)水平較低,三者兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但均顯著低于其在前列腺癌細(xì)胞P

5、C-3、乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:BMP-7表達(dá)的光密度均值在前列腺增生組織中為70.55±5.41,在前列腺癌組織中為70.47±6.18,兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BMP-7表達(dá)的光密度均值在前列腺癌無骨轉(zhuǎn)移組中為65.94±1.76,在前列腺癌伴有骨轉(zhuǎn)移組中為74.80±5.76,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.重組質(zhì)粒表達(dá)載體pGPU6/GF

6、P/Neo-BMP7-shRNA經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定,證實(shí)插入載體目的基因片段大小與插入方向正確。
　　 結(jié)論:
　　 1.BMP-7在不同腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平不一致,在嗜骨性腫瘤細(xì)胞中BMP-7的表達(dá)水平較高,BMP-7可能與腫瘤的骨轉(zhuǎn)移潛能有相關(guān)性。
　　 2.BMP-7在已發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的前列腺癌組織中較高水平表達(dá),其可能是促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞發(fā)生成骨轉(zhuǎn)移的重要細(xì)胞因子。
　　 3.針對(duì)BMP-7基因的pGPU