RNA激活介導(dǎo)E-鈣粘蛋白上調(diào)表達(dá)的抗腫瘤作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文RNA激活介導(dǎo)E-鈣粘蛋白上調(diào)表達(dá)的抗腫瘤作用及其機(jī)制的研究姓名：毛褀琦申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)（泌尿外科）指導(dǎo)教師：謝立平20100401浙江大學(xué)博t ：學(xué)位論文 中j [ 摘要第二部分E ．鈣粘蛋白小激活R N A 的抗腫瘤作用目的 評(píng)價(jià)已證實(shí)的E ．鈣粘蛋白( E ．c a d h e r i n ) 小激活R N A ( d s E c a d 一2 1 5 ) 對(duì)膀胱癌5 6 3 7 細(xì)胞及前列

2、腺癌P C 3 細(xì)胞的腫瘤抑制作用。方法將與E —c a d h e r i n 基因啟動(dòng)子D N A 序列互補(bǔ)的雙鏈R N A 分子( d s E c a d ．2 1 5 ) 分別轉(zhuǎn)染入5 6 3 7 細(xì)胞和P C 3 細(xì)胞中，采用R T - P C R 法及W e s t e r nb l o t t i n g 法檢測(cè)E ．c a d h e r i n 在m R N A 及蛋白水平上的表達(dá)；采用T r a n s w e l

3、l 小室法及劃痕法檢測(cè)d s E c a d - 2 1 5 轉(zhuǎn)染后腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移能力的改變。結(jié)果d s E c a d ．2 1 5 轉(zhuǎn)染5 6 3 7 細(xì)胞和P C 3 細(xì)胞7 2h 后E ．c a d h e r i n 表達(dá)顯著上調(diào)，R N A a 有效；5 6 3 7 細(xì)胞和P C 3 細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的侵襲能力及遷移能力也明顯下降。結(jié)論R N A a 技術(shù)激活E ．c a d h e r i n 基因表達(dá)并抑制膀胱癌及前

4、列腺癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移等惡性行為，可作為惡性腫瘤基因治療的一種有效手段。第三部分小激活R N A 上調(diào)E ．鈣粘蛋白表達(dá)的機(jī)制研究目的 探討d s E c a d ．2 1 5 上調(diào)E ．c a d h e r i n 基因表達(dá)的相關(guān)分子機(jī)制方法采用基因特異性R T - P C R 檢測(cè)5 6 3 7 細(xì)胞E ．c a d h e r i n 啟動(dòng)子相關(guān)非編碼正義或反義R N A 的表達(dá)，以及d s E c a d 一2 1 5 轉(zhuǎn)染后其

5、表達(dá)量的變化；利用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)d s E c a d ．2 1 5 轉(zhuǎn)染后E —c a d h e r i n 啟動(dòng)子區(qū)域相關(guān)組蛋白修飾狀態(tài)的變化；采用R T - P C R 法檢測(cè)d s E c a d ．2 1 5 作用后干擾素通路O A S l 及O A S 3 基因表達(dá)的變化。結(jié)果E ．c a d h e r i n 啟動(dòng)子區(qū)域存在非編碼正義和反義R N A ；d s E c a d ．2 1 5 轉(zhuǎn)染后E ．c a

6、 d h e r i n 啟動(dòng)子相關(guān)非編碼反義和反義R N A 的表達(dá)未發(fā)生明顯變化，E ．c a d h e r i n啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白3 賴氨酸9 ( H 3 K 9 ) 和組蛋白3 賴氨酸4 ( H 3 K 4 ) 二甲基化的水平明顯降低，干擾素通路中O A S l 和O A S 3 基因的表達(dá)沒有明顯升高。結(jié)論d s E c a d ．2 1 5 轉(zhuǎn)染5 6 3 7 細(xì)胞后并沒有影響非編碼正義和反義R N A 的表達(dá)水平，而可能