E-鈣粘蛋白在哮喘大鼠氣道上皮的表達(dá)及羅紅霉素的干預(yù)作用.pdf

1、目的：1.觀察E-鈣粘蛋白（E-cadherin，E-cad）、β-連環(huán)素（β-catenin，β-cat）在哮喘大鼠氣道上皮的表達(dá)。2.觀察地塞米松和羅紅霉素對(duì)哮喘大鼠氣道上皮E-鈣粘蛋白、β-連環(huán)素的影響。3.進(jìn)一步探討羅紅霉素的抗哮喘作用機(jī)制。 方法：清潔級(jí)SD大鼠32只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（C組）、哮喘組（A組）、地塞米松干預(yù)（D組）和羅紅霉素干預(yù)組（R組），每組8只。利用卵白蛋白（ovalbumin，OVA）建立大鼠哮

2、喘模型，正常對(duì)照組用生理鹽水代替OVA進(jìn)行致敏和激發(fā)。末次激發(fā)24小時(shí)后腹腔注射麻醉，股動(dòng)脈放血處死大鼠。BALF沉渣涂片進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELASA）測(cè)定支氣管肺泡灌洗液中TNF-α的濃度。肺組織HE染色，光鏡觀察肺組織病理結(jié)構(gòu)變化。免疫組化（immunohistochemistry，IHC）觀察大鼠肺組織中E-cad、β-cat的表達(dá)，以Western-blot法檢測(cè)肺組織中E-cad、β-cat含量。 結(jié)

3、果： 1.光鏡：HE染色見A組大鼠支氣管及血管周圍、肺間質(zhì)內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞及其他炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管粘膜下水腫，粘液腺增生，粘膜皺折增多，部分粘膜上皮細(xì)胞脫落，可見氣道粘液栓；C組未見上述現(xiàn)象；R組上述現(xiàn)象減輕；D組上述現(xiàn)象明顯減輕。 2.BALF中炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)：BALF中細(xì)胞總數(shù)在A組（5.03±0.42）×109/L高于C組（1.48±0.20）×109/L，EOS占細(xì)胞總數(shù)的百分比（EOS%）在A組（7.03±1.4

4、1）%高于C組（0.72±0.25）%（均P<0.01）； BALF中細(xì)胞總數(shù)D組和R組分別為（2.30±0.23）×109/L、（2.83±0.28）×109/L，EOS占細(xì)胞總數(shù)的百分比（EOS%）D組和R組分別為（2.48±0.38）%和（4.20±0.75）%，均低于A組（P<0.01）。 3.BALF中TNF-α含量：A組（164.48±54.4pg/ml）、D組（81.60±22.15pg/ml）、R組（129.12

5、±27.32pg/ml）BALF中TNF-α含量均高于C組（25.66±11.55pg/ml）（P<0.01），D組低于A組（P<0.01），R組低于A組（P<0.05）。 4.各組大鼠肺組織E-cad免疫組化結(jié)果比較：E-cad主要表達(dá)在氣道上皮細(xì)胞，少許表達(dá)在肺泡上皮細(xì)胞，E-cad陽性反應(yīng)定位于上皮細(xì)胞膜上。E-cad在C組大鼠氣管、細(xì)支氣管均有表達(dá)，呈連續(xù)線性分布，細(xì)胞連接處的側(cè)面為深染，細(xì)胞質(zhì)不著色，細(xì)胞輪廓清晰。A組

6、大鼠陽性細(xì)胞減少、表達(dá)強(qiáng)度減弱，為不連續(xù)表達(dá)，出現(xiàn)部分胞漿表達(dá)，細(xì)胞界線模糊不清。在表達(dá)減弱處有較多炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。D組和R組E-cad陽性表達(dá)少于C組，但比A組明顯。 5.Western Blot法檢測(cè)各組大鼠肺組織的E-cad表達(dá)情況：C組大鼠肺組織E-cad/tublin IOD比值為1.41±0.15； A組比值（0.36±0.03）較C組明顯降低（P<0.01）；D組比值為0.99±0.05，R組比值為0.80±0.07

7、，兩藥物干預(yù)組均較A組明顯升高（P<0.01），均較C組降低（P<0.01）。 6.各組大鼠肺組織β-cat免疫組化結(jié)果：β-cat主要表達(dá)在氣道上皮細(xì)胞，少許表達(dá)在肺泡上皮細(xì)胞，在C組β-cat主要表達(dá)在胞膜上；A組氣道上皮細(xì)胞上β-cat陽性細(xì)胞減少，表達(dá)強(qiáng)度減弱，部分胞漿表達(dá)。D組和R組β-cat陽性表達(dá)少于C組，但比A組明顯，主要是胞膜和胞漿表達(dá)。 7.Western Blot法檢測(cè)各組大鼠肺組織的β-cat表達(dá)

8、情況：C組大鼠肺組織β-cat/tublin IOD比值為0.48±0.03；A組比值（0.08±0.01）較C組明顯降低（P<0.01）；D組比值為0.33±0.02，R組比值為0.23±0.02，兩藥物干預(yù)組均較A組明顯升高（P<0.01），均較C組降低（P<0.01）。 8.相關(guān)分析結(jié)果：BALF液中EOS百分比與TNF-a濃度呈顯著性正相關(guān)（r=0.718，P<0.01，n=32）。肺組織E-cad與β-cat的相關(guān)分析

9、呈顯著性正相關(guān)（r=0.964，P<0.01，n=24）。大鼠肺組織E-cad、β-cat的表達(dá)與BALF中的EOS百分比均呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.845，P<0.01； r=-0.813，P<0.01，n=24），大鼠BALF液中TNF-a與肺組織E-cad、β-cat的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.832，P<0.01； r=-0.877，P<0.01，n=24）。 結(jié)論： 1.哮喘大鼠氣道上皮細(xì)胞E-cad、β-ca