腸化和不典型增生胃粘膜組織環(huán)氧化酶-2、血管內皮生長因子的表達及其與幽門螺桿菌感染的相關性研究.pdf

1、前言: 胃癌的發(fā)病是一個多因素，多階段的復雜發(fā)展過程，涉及多種基因調控的異常改變。迄今為止的研究表明：幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，H.pylori)感染和胃癌的發(fā)生密切相關，已被WHO列為I類致癌因子。環(huán)氧化酶(Cyclooxygenase，COX)是花生四烯酸代謝成前列腺素過程中的限速酶，COX不僅是啟動炎癥反應的關鍵酶，還與原癌基因的突變、腫瘤促進因子、細胞因子及其受體乃至病原菌如H.pylori感染有

2、關。血管內皮生長因子(Vascularendothelialgrowthfactors，VEGF)是刺激腫瘤血管、淋巴管生成的主要細胞因子。本實驗是在現(xiàn)有的研究基礎上，通過觀察各種病變的胃粘膜組織中H.pylori感染與COX-2，VEGF的表達水平，探討三者在癌前病變組織內的相互關系，進一步評估在胃癌癌前病變組織與胃癌組織中三者的表達有何異同，闡明H.pylori感染是通過誘生COX-2再促進VEGF的表達，還是H.pylori感染直

3、接刺激VEGF的表達，或兩者兼有，以期為臨床應用COX-2抑制劑、選擇性血管抑制劑，預防和治療H.pylori相關性胃疾病提供理論依據(jù)。 材料與方法: 標本：收集2007年11月-2008年12月因上消化道癥狀于我院行胃鏡檢查取病理活檢者172例(除外2個月內接受過抗H.pylori治療及服用過NSAID者)，男80例，女92例，年齡35歲-80歲，平均年齡53±12歲。其中慢性淺表性胃炎(chronicsuperfic

4、ialgastritis，CSG)胃粘膜組織36例；慢性萎縮性胃炎(chronicatrophicgastritis，CAG)胃粘膜組織36例，均不伴有腸化和(或)不典型增生；中度以上的腸上皮化生胃粘膜組織(intestinalmetaplasia，IM)44例，腸化不伴有萎縮及不典型增生；中度以上不典型增生胃粘膜組織(dysplasia，DYS)56例。 主要試劑：鼠抗人COX-2單克隆抗體；兔抗人VEGF多克隆抗體；免疫組化

5、SABC染色試劑盒和DAB顯色液；伊紅；Giemsa染色液主要儀器：石蠟切片機、冰箱、微波爐、奧林巴斯顯微鏡實驗方法：以HE染色后光學顯微鏡下見“S”型彎曲桿狀細菌和改良Giemsa染色后鏡下見典型的紫蘭色螺旋樣菌為H.pylori陽性，兩項均陽性者即診斷為H.pylori感染；免疫組織化學SABC法測胃粘膜組織中COX-2、VEGF的表達，以PBS替代-抗作陰性對照，用已知COX-2和VEGF表達陽性的乳腺癌組織切片作為陽性對照，陽性

6、細胞為胞漿內和(或)細胞核內出現(xiàn)棕黃色顆粒，采用病理圖文報告分析系統(tǒng)進行平均光密度測定，將免疫組化染色結果轉化為平均光密度值(averageopticaldensity，AOD)進行定量分析；應用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包進行x2檢驗、單因素方差分析、Scheffe法、t檢驗及Pearson相關性檢驗的統(tǒng)計學分析，P<0.05表示有統(tǒng)計學差異，P<0.01表示有顯著統(tǒng)計學差異。 結果: (1)不同病變胃粘膜組織中H.py

7、lori表達以DYS組最高76.8％，其次為IM組63.6％，CAG組58.3％，CSG組最低27.8％，各組之間統(tǒng)計學處理差異顯著(P<0.01)。 (2)COX-2蛋白的平均光密度值(AOD)CSG組最低13.81±5.53，CAG組為45.28±21.44，IM組為73.67±26.02，DYS組最高為91.23±45.11，IM、DYS組間的表達程度無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，余各組間差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05

8、)，IM、DYS與CSG組間差異顯著(P<0.01)。VEGF蛋白的AOD值CSG、CAG、IM三組分別為1.00±1.18、1.48±1.24、1.58±0.90，三組間差異不顯著，無統(tǒng)計學意義，但與DYS組9.54±9.15比較差異顯著(P<0.01)。 (3)H.pylori感染與COX-2表達的關系：COX-2在H.pylori感染陽性CAG、IM及DYS組的表達程度明顯高于H.pylori感染陰性組，尤其IM和DYS組

9、內差異顯著(P<0.01)。 (4)H.pylori感染與VEGF表達的關系：VEGF的表達程度在H.pylori感染陽性與H.pylori感染陰性組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 (5)COX-2與VEGF的相關性分析：隨著胃粘膜病變程度的加重，COX-2與VEGF的表達水平成明顯正相關性(r=0.640，P<0.01)。 討論: IM和DYS統(tǒng)稱癌前病變，是胃癌發(fā)生的不同階段，H.pylori感

10、染是公認的胃癌I類致癌因子，主要作用于癌變的起始階段。在本實驗中我們發(fā)現(xiàn)H.pylori感染率在DYS組最高，其次為IM、CAG、CSG，各組之間比較具有顯著性差異(P<0.01)，證明H.pylori感染在胃癌發(fā)生的早期即起一定作用，隨著病變的加重H.pylori感染率逐漸升高。近年研究表明，COX-2有促進細胞增生、抑制細胞凋亡、調節(jié)腫瘤新生血管形成的促癌作用。本實驗研究結果顯示COX-2蛋白的表達程度在CSG組最弱，隨著病變程度的

11、加重其表達呈遞增趨勢，IM、DYS兩組之間的表達程度無差異(P>0.05)，余各組之間差異顯著(P<0.05)，尤其IM、DYS與CSG組之間比較差異顯著(P<0.01)，提示COX-2在癌前病變的胃粘膜組織即開始較高表達，且COX-2表達的上調程度與胃粘膜病變程度有關，分析其機制可能為：長期H.pylori感染引起胃粘膜上皮損傷誘導COX-2的表達，導致包括COX-2的多個原癌基因激活，抑癌基因失活，粘膜細胞增殖與凋亡失衡。VEGF是

12、目前了解最為深入的血管生成家族，其作用是刺激腫瘤血管、淋巴管生成，在胃癌的早期即有所分泌，參與微血管的形成，而微血管的生成直接影響胃癌的發(fā)生、發(fā)展及預后。本試驗結果，在CAG、IM及DYS胃粘膜病變的不同階段，H.pylori陽性胃粘膜病變組織的COX-2的表達程度均高于H.pylori陰性者，尤其IM及DYS組差異更加明顯，說明H.pylori感染可以使COX-2表達增強，并且可能主要作用在胃癌發(fā)生的前期；H.pylori感染各階段的

13、胃粘膜病變組織VEGF的表達無統(tǒng)計學差異，即H.pylori感染對VEGF在胃粘膜病變中的表達無影響；但隨著胃粘膜病變程度的加重，COX-2與VEGF的表達水平成明顯正相關性，其可能的機制是COX-2通過催化合成前列腺素PGE2、誘導VEGF表達上調，而VEGF又通過KDR信號傳導通路進一步誘導COX-2表達，二者通過相互作用而促進腫瘤血管生成，加速胃癌癌前病變向胃癌發(fā)展的進程。因此H.pylori感染誘導COX-2的表達上調，COX-

14、2的高表達又促使了VEGF的表達，在胃癌癌前病變向胃癌的發(fā)展中起重要作用。由理論推知進行臨床除菌治療、應用選擇性COX-2抑制劑及血管抑制劑，可以在一定程度上預防胃癌癌前病變向胃癌的轉化。 結論: (1)COX-2表達在DYS中最強；VEGF在胃粘膜病變初期呈微弱表達，僅在DYS時始表達增強。 (2)H.pylori感染的CAG、IM、DYS粘膜組織COX-2表達增強，H.pylori感染與VEGF表達無關，提示