固定化酶柱與固定化菌體柱耦聯(lián)——高效拆分乙酰-DL-蛋氨酸.pdf

1、本文首次將固定化菌體與固定化酶實現(xiàn)了耦聯(lián),用于拆分乙酰-DL-蛋氨酸.先用固定化菌體在間歇振蕩反應器內對乙酰-DL-蛋氨酸進行初拆分,再用固定化酶在填充床反應器內進行高效拆分.包括以下內容:氨基?；腹潭ɑd體的篩選.考察了十四種不同型號、性能的弱堿性大孔樹脂固定化酶活,研究發(fā)現(xiàn),DEAE-D/H-Ⅲ固定化氨基酰化酶的效果最好,固定化酶活1356.41U/g.研究了不同給酶量下DEAE-D/H-Ⅲ固定化酶活力收率.結果表明:酶液濃度11

2、5U/g時,酶活力收率最高,為59.49﹪.具體分析了此固定化酶性質.結果表明,最佳pH、酶活最高時的反應溫度和CO<'2+>濃度分別為6.5、65℃和5×10<'-4>mol/L.同時考察了固定化酶的穩(wěn)定性、再生性.在37℃下,固定化酶連續(xù)拆分乙酰-DL-蛋氨酸30天,酶活力降為最初的72.6﹪.失活的固定化酶經洗脫、再生后,酶活達1380.64U/g,達到新樹脂固定化效果,證明載體再生性較好.米曲霉菌體(Aspergillus or

3、yzae3042)的液體培養(yǎng)和固定化研究.選用豆汁培養(yǎng)基,參照文獻規(guī)定的培養(yǎng)條件進行培養(yǎng),經冷凍干燥機干燥后菌體酶活2039U/g.采用甲醛和明膠固定化后的菌體酶活1708.68U/g,固定化效率為83.76﹪.研究固定化菌體拆分乙酰-DL-蛋氨酸的性質.結果表明最佳pH、酶活最高時的反應溫度和CO<'2+>濃度分別為8.0、65℃和5×10<'-4>4mol/L. 固定化酶和固定化菌體動力學研究.考察了底物濃度、產物濃度對拆

4、分反應的影響.研究表明:固定化酶底物抑制濃度0.4 mol/L,低底物濃度下拆分反應符合米氏方程,米氏常數(shù)Km為6.19mmol/L,不存在產物抑制；固定化菌體底物抑制濃度0.2 mol/L,產物抑制濃度0.01 mol/L,低濃度下拆分反應符合米氏方程,米氏常數(shù)Km為7.76mmol/L.間歇振蕩反應器和填充床反應器模型建立.得出間歇振蕩反應器在指定拆分率下的反應時間；對填充床模型進行了驗證,結果表明,當?shù)孜餄舛?.2 mol/L時,