大蒜素對家蠶病原真菌的抑制作用及機理研究.pdf

1、為了解決在蠶病防治中所造成的環(huán)境污染問題,以開發(fā)植物源藥劑為目的,探明大蒜素的抑菌功能,本文從對家蠶具有高毒力菌株的篩選開始,系統(tǒng)研究了大蒜素對家蠶具有高毒力病原白僵菌的抑制作用,探討了外界條件對大蒜素穩(wěn)定性的影響,并從大蒜素對真菌膜功能的影響方面進行了抑菌機理的研究。實驗結果將為開發(fā)大蒜素為新型蠶藥提供依據(jù)。 1.幾種對家蠶高毒力白僵菌菌株的篩選。 以分離的5株白僵菌菌株為材料,對其營養(yǎng)生長量、產(chǎn)孢量和致病力等生物學指

2、標進行了綜合比較,結果表明：不同菌株的各個指標均存在差異,其中B07-2營養(yǎng)生長量最快,產(chǎn)孢量最高,10d內(nèi)對家蠶的致病率為98.18％,其對家蠶的致死中時LT50為5.09d,致死中濃度LC50為2.69×106孢子/mL。 2.大蒜素對家蠶病原真菌(B07-2)的抑制作用。 通過對大蒜素對家蠶病原白僵菌B07-2的孢子萌發(fā)和菌落擴散的抑制作用的測定,得出大蒜素對家蠶病原白僵菌的抑制作用隨濃度的升高而升高,在大蒜素濃度

3、為10μL/mL時,抑制作用最強,3d的抑制率分別為92.67％和91.07％,抑制中濃度IC50分別為2.79μL/mL和1.41μL/mL。 通過對最小抑制濃度(MIC)和最小致死濃度(MLC)的測定,得出大蒜素對白僵菌Bb07-2的MIC和MLC分別為5.00μL/mL和7.50μL/mL。 3.酸堿度和溫度對大蒜素抑制效果的影響。 通過pH值和溫度對大蒜素抑菌效果的影響測定得出,大蒜素在中性和酸性(pH≤

4、7)和溫度低于60℃條件下的抑菌效果穩(wěn)定,在堿性(pH＞7)和高溫(＞80℃)環(huán)境下,抑菌效果明顯降低,說明大蒜素是對堿和熱不穩(wěn)定的物質(zhì)。 4.大蒜素對家蠶病原白僵菌(B07-2)抑制機理研究。 為了探討大蒜素對真菌膜功能的影響,分析了大蒜素對真菌在生長過程中吸收利用營養(yǎng)物質(zhì)速率的影響、大蒜素濃度與原生質(zhì)膜傷害率的關系、大蒜素對白僵菌細胞離子運輸和離子梯度維系能力的影響,用考馬斯亮藍G-250染色法、3,5-二硝基水楊酸

5、比色法、外滲電導法以及ATPase測試盒分別進行測定,結果表明：大蒜素處理后的病原白僵菌在生長過程中對蛋白質(zhì)和糖的吸收利用速率比對照分別降低了64.83％和69.64％：對病原白僵菌細胞內(nèi)電解質(zhì)外滲率的傷害率隨大蒜素濃度的升高而增加,也就是對細胞原生質(zhì)膜的傷害率增大；對ATPase活力測定發(fā)現(xiàn)大蒜素處理組與對照組比較而言,真菌細胞中的各種ATPase活力都有大幅度的降低。其中Na+K+-ATPase降低了84.36％,Ca++Mg++-