大蒜素對人胃癌SGC-7901細(xì)胞的抑制作用及相關(guān)機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的:
　　本課題在人胃癌SGC-7901細(xì)胞上,研究大蒜素(diallyl trisulfide,allicin)對體外生長的人胃癌細(xì)胞生長、遷移及侵襲的作用并對其相關(guān)機(jī)制做初步探討,為研究大蒜素的抗腫瘤作用靶點(diǎn)和臨床上應(yīng)用提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)對人胃癌SGC-7901細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
　　1.分別用12、24和48μg/ml三個(gè)濃度的大蒜素溶液對對

2、數(shù)生長期的SGC-7901細(xì)胞干預(yù)12、24和48小時(shí)后,采用MTT法檢測人胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖情況,同時(shí)用流式細(xì)胞儀AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測人胃癌SGC-7901細(xì)胞的凋亡情況。
　　2.采用腫瘤細(xì)胞劃痕愈合法檢測不同濃度大蒜素對人胃癌SGC-7901細(xì)胞作用12、24和48小時(shí)后細(xì)胞遷移的變化;采用Transwell小室法檢測不同濃度大蒜素對人胃癌細(xì)胞株SGC-7901作用24小時(shí)后細(xì)胞侵襲的變化。<

3、br>　　3.觀察不同濃度的大蒜素對SGC-7901細(xì)胞作用48小時(shí)后,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測大蒜素對人胃癌SGC-7901細(xì)胞MMP-2、HMGB-1蛋白釋放的影響;同時(shí)采用Westernblot法檢測大蒜素對人胃癌SGC-7901細(xì)胞MMP-2、HMGB-1蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1.鏡下觀察結(jié)果表明24和48μg/ml大蒜素作用48h后,與正常對照組相比,SGC-7901細(xì)胞體積變小,細(xì)胞呈圓

4、形,并伴有大量的細(xì)胞碎片出現(xiàn),漂浮細(xì)胞數(shù)量明顯增加,且48μg/ml組比24μg/ml組變化更為明顯,12μg/ml組變化不太明顯。
　　2.MTT結(jié)果顯示,與陰性對照組比較,12、24和48μg/ml大蒜素對培養(yǎng)12、24和48h時(shí)的SGC-7901細(xì)胞增殖具有明顯的抑制作用﹙P<0.05﹚,且隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長,其抑制作用也相應(yīng)地增強(qiáng)。
　　3.AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)果顯示,大蒜素可明顯

5、誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞的凋亡,12、24和48μg/ml大蒜素組的SGC-7901細(xì)胞凋亡率從對照組的3.95±1.45％分別上升至6.28±0.59%、11.15±0.20%﹙P<0.05﹚和30.67±2.73%﹙P<0.01﹚,并呈一定濃度依賴性。
　　4.劃痕愈合結(jié)果顯示,大蒜素可明顯抑制SGC-7901細(xì)胞的遷移,與對照組相比,12和24μg/ml大蒜素可顯著抑制劃痕12、24和48h時(shí)傷痕寬度的變窄﹙P<0.01﹚,

6、并呈一定的時(shí)效關(guān)系,48h時(shí)抑制最為明顯。
　　5.Transwell小室法結(jié)果顯示,在12和24μg/ml大蒜素作用細(xì)胞24h,穿過Transwell小室下室面的細(xì)胞數(shù)從對照組的96.80±5.07個(gè)分別降至66.60±2.41和31.20±2.17個(gè),提示大蒜素可以抑制人胃癌SGC-7901細(xì)胞的侵襲(P<0.05),且呈濃度依賴關(guān)系。
　　6.ELISA結(jié)果顯示,12、24和48μg/ml大蒜素作用48h時(shí),人胃癌SG

7、C-7901細(xì)胞MMP-2蛋白釋放量從對照組的32.01±2.52ng/ml分別降至24.69±0.93、17.46±1.63和5.49±1.00ng/ml;HMGB-1蛋白釋放量從對照組的1.32±0.14ng/ml分別降至0.89±0.05、0.65±0.03和0.15±0.13ng/ml,結(jié)果表明大蒜素可以下調(diào)SGC-7901細(xì)胞MMP-2、HMGB-1蛋白的釋放量(P<0.05),且呈濃度依賴的關(guān)系。
　　7.Wester