大蒜素對黑素瘤誘導(dǎo)淋巴管增生及黑素瘤增殖的抑制作用研究.pdf

1、目的：誘導(dǎo)建立小鼠淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成的良性腫瘤模型，觀察小鼠黑素瘤細(xì)胞B16-F1體外對淋巴管增生的影響，探討大蒜素抑制小鼠黑素瘤細(xì)胞B16-F1體外誘導(dǎo)淋巴管增生及大蒜素對小鼠黑素瘤細(xì)胞B16-F1增殖及凋亡的影響。 方法：8周齡C57BL/6小鼠16只腹腔注射弗氏不完全佐劑，間隔15天2次，分批處死小鼠后，對誘導(dǎo)出的小鼠腹腔新生物進(jìn)行病理組織學(xué)觀察，用免疫組織化學(xué)方法檢測淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志性抗原VEGF-C和Flt-4。分離

2、、分切腫物后，于纖維蛋白凝膠內(nèi)用單純B16-F1細(xì)胞條件培養(yǎng)液培養(yǎng)及分別加入不同濃度(3、6、9μg/m1)的大蒜素細(xì)胞條件培養(yǎng)液培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察。傳代培養(yǎng)小鼠黑素瘤B16-F1細(xì)胞，使細(xì)胞濃度為5×104個/ml，分別加入不同濃度(3、6、9、12、15μg/ml)的大蒜素細(xì)胞培養(yǎng)液。培養(yǎng)不同時(shí)間后，用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測細(xì)胞毒性，用原位末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測細(xì)胞凋亡，用定量RT-PCR法檢測了不同濃度的大蒜素作用小鼠黑

3、素瘤細(xì)胞B16-F1后腫瘤細(xì)胞ras基因的表達(dá)水平。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)小鼠中13只(81.3％)膈肌腹腔面、肝臟表面及側(cè)腹壁腹腔面可見邊界清楚的散在分布白色腫瘤樣組織，常規(guī)和超微病理發(fā)現(xiàn)為由內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成的多管腔囊性結(jié)構(gòu)，并表達(dá)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志性抗原VEGF-C和Flt-4，對照小鼠中未見新生物。倒置顯微鏡下可觀察到從淋巴管瘤塊長入纖維蛋白凝膠內(nèi)的微淋巴管，B16-F1細(xì)胞條件培養(yǎng)液可促進(jìn)淋巴管的生成。不同濃度的大蒜素對B16-F1細(xì)

4、胞條件培養(yǎng)液促進(jìn)淋巴管生成作用有一定的抑制。不同濃度的大蒜素對腫瘤細(xì)胞均有殺傷作用，當(dāng)大蒜素的濃度較低時(shí)，如3μg/ml或6μg/ml，可以明顯誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，并且呈顯著的濃度時(shí)間相關(guān)性，當(dāng)大蒜素的濃度較高時(shí)，反而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡作用不明顯。不同濃度的大蒜素對腫瘤細(xì)胞ras基因的表達(dá)均有不同程度的下調(diào)作用，并且呈顯著的濃度相關(guān)性。 結(jié)論：小鼠腹腔注射弗氏不完全佐劑可穩(wěn)定誘導(dǎo)小鼠腹腔淋巴管瘤。B16-F1細(xì)胞對淋巴管的生成有