慢性靜脈功能不全發(fā)病機(jī)制的系統(tǒng)生物學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　慢性靜脈功能不全(CVI)是以下肢靜脈返流和持續(xù)性的靜脈高壓為主要特征的血管外科常見疾病，其發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚。本課題旨在利用miRNAs基因芯片技術(shù)、生物信息學(xué)技術(shù)、蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和代謝組學(xué)技術(shù)等系統(tǒng)生物學(xué)研究方法，分別從miRNAs轉(zhuǎn)錄組學(xué)水平、蛋白質(zhì)組學(xué)水平及代謝組學(xué)水平對(duì)其發(fā)病機(jī)制進(jìn)行探討，尋找在CVI發(fā)病過程中起關(guān)鍵作用的miRNAs及其靶基因、蛋白質(zhì)以及代謝產(chǎn)物，為CVI發(fā)病的潛在分子機(jī)理的闡明提供重要的

2、方法和新的線索。
　　方法：
　　1.利用人miRNAs寡核苷酸芯片分別對(duì)5例CVI患者曲張大隱靜脈(GSV)中膜組織和5例正常對(duì)照組GSV中膜組織進(jìn)行miRNAs轉(zhuǎn)錄組學(xué)水平研究，篩選出差異表達(dá)的miRNAs。隨后，利用生物信息學(xué)的方法研究差異表達(dá)的miRNAs及其靶基因參與CVI的發(fā)病過程。最后，采用RealtimeRT-PCR技術(shù)檢測(cè)miR-34a、miR-202和miR-155的表達(dá)情況，同時(shí)對(duì)芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。

3、r>　　2.利用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)（iTRAQ）聯(lián)合毛細(xì)管高效液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)對(duì)10例CVI患者曲張GSV中膜組織和10例正常對(duì)照組GSV中膜組織進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)水平研究。結(jié)合miRNAs及其靶基因生物信息學(xué)分析結(jié)果，采用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)驗(yàn)證S100A8和S100A9蛋白在CVI中的表達(dá)情況，同時(shí)對(duì)蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
　　3.利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)對(duì)15例CVI患者曲張GSV中膜組織和15例正常對(duì)照

4、組GSV中膜組織進(jìn)行代謝組學(xué)水平研究。隨后，對(duì)分離和鑒定出的差異代謝物進(jìn)行查庫(kù)檢索，初步了解它們?cè)贑VI的發(fā)病過程中可能參與的代謝途徑變化。
　　結(jié)果：
　　1.miRNAs轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究篩選出CVI中差異表達(dá)的miRNAs14個(gè)，其中上調(diào)表達(dá)9個(gè)，下調(diào)表達(dá)5個(gè);RealtimeRT-PCR證實(shí)了miR-34a、miR-202、miR-155的表達(dá)情況同芯片結(jié)果一致;生物信息學(xué)研究證明差異表達(dá)的miRNAs及其靶基因通過許多信

5、號(hào)通路廣泛參與CVI的發(fā)病過程。
　　2.蛋白質(zhì)組學(xué)研究篩選出CVI中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)共28種，其中上調(diào)表達(dá)17種，下調(diào)表達(dá)11種。蛋白質(zhì)印跡技術(shù)驗(yàn)證了S100A8和S100A9蛋白在CVI中呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)，結(jié)果同蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果一致。
　　3.代謝組學(xué)研究分離和鑒定了CVI中差異表達(dá)的16種代謝產(chǎn)物，其中6種上升，10種下降。查庫(kù)檢索證明這些代謝產(chǎn)物與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及氧化應(yīng)激代謝有關(guān)。
　　結(jié)論：