基于血糖血脂和肝功同步快速檢測的干試劑研究.pdf

1、目的： 隨著社會的不斷進(jìn)步，人們對醫(yī)學(xué)檢驗多樣性的要求已越來越高，醫(yī)學(xué)檢驗已不再僅僅是在大醫(yī)院才開展，它已經(jīng)進(jìn)入到社區(qū)、家庭、現(xiàn)場等需要其存在的地方。為了肝功、血脂等生化檢驗項目的操作更簡便、儀器攜帶更方便、試劑保存更容易；為了使常規(guī)生化檢驗隨時隨地都可開展，以滿足健康體檢、社區(qū)醫(yī)療服務(wù)的需要，我們探討研制一種多孔生化反應(yīng)板，將血糖血脂和肝功相關(guān)的七個常規(guī)生化指標(biāo)組合在一起，通過對方法進(jìn)行改良與改進(jìn)，制成干化學(xué)試劑，探討同步檢測

2、的可行性，將多孔生化反應(yīng)板與微型生化分析儀相結(jié)合，開發(fā)干試劑型多項目微型生化分析儀，以達(dá)到快速、簡便檢測的目的。該項目的成功也為開發(fā)適用范圍更廣、功能更完善的類似檢驗裝置奠定基礎(chǔ)。 由于本項目由多人協(xié)同攻關(guān)，這里重點介紹血糖血脂和肝功相關(guān)的幾個生化干試劑的研制。 方法： 1、為每一個測定的項目選擇一種合適的方法及試劑盒，要求試劑可以配制成單試劑工作液，能夠完全冷凍干燥，檢測波長在380nm～780nm之間。

3、 2、對試劑和測定方法進(jìn)行改良和改進(jìn)，使檢測方法能適應(yīng)干試劑法檢測的需要。用白行合成的高靈敏色原——TBHBA替換葡萄糖試劑中的苯酚色原，其它方法根據(jù)需要調(diào)整樣品試劑稀釋比，提高方法的靈敏度。 3、將試劑工作液制成干試劑，對干燥的方法進(jìn)行比較。采取冷凍干燥的方法時，加入凍干添加劑改善干試劑的復(fù)溶性和反應(yīng)性，對添加劑的種類和濃度進(jìn)行篩選。 4、對關(guān)鍵的檢測條件進(jìn)行統(tǒng)一，以滿足多項生化板同步檢測的需要。將反應(yīng)體系的終體積定

4、為200μl，使測量光徑約為7mm，反應(yīng)溫度為37℃，反應(yīng)時間為10min，觀察測定方法的線性范圍和靈敏度，并與生化分析儀方法進(jìn)行比較。 5、用建立的干試劑方法對40例標(biāo)本的血糖血脂和肝功進(jìn)行同步檢測，將結(jié)果與生化分析儀結(jié)果進(jìn)行比較，探討干試劑方法同步檢測血糖血脂和肝功的可行性。 主要結(jié)果： 1、以TBHBA替代酚試劑，添加10/L白蛋白凍干葡萄糖(氧化酶法)試劑，增加稀釋倍數(shù)，提高了反應(yīng)速度，靈敏度提高了4.6

5、倍，增加了線性范圍，降低了檢測限，優(yōu)化的方法測定結(jié)果與全自動生化分析儀結(jié)果具有較好的一致性。 2、添加10g/L甘氨酸凍干甘油三酯(氧化酶法)試劑，降低稀釋倍數(shù)至1:50稀釋樣品對TG進(jìn)行測定，結(jié)果較好的兼顧了靈敏度和線性范圍，顯色穩(wěn)定性較好，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，具有實用性。 3、添加10g/L白蛋白凍干總膽固醇(氧化酶法)試劑，降低稀釋倍數(shù)至1:50稀釋樣品，結(jié)果較好的兼顧了靈敏度和線性范圍，顯色穩(wěn)定性較好，測定結(jié)果與生

6、化分析儀的結(jié)果具有較好的一致性。 4、沒有找到適合凍干總蛋白和白蛋白試劑的添加劑，初步考察了不加添加劑的情況下凍干試劑的線性范圍和靈敏度，發(fā)現(xiàn)總蛋白超過80g/L、白蛋白超過40g/L時出現(xiàn)偏離線性的現(xiàn)象，靈敏度都有待提高。 5、選取了一種重氮試劑測定總膽紅素，用水溶解發(fā)色劑，然后冷凍干燥，用原裝試劑盒的溶解液稀釋標(biāo)本進(jìn)行檢測，方法的靈敏度較高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。 6、選用丙酮酸氧化酶法試劑盒以速率法測定ALT，添加

7、10g/L白蛋白凍干試劑，ALT在3361U/L以下時線性良好(r=0.9978)，該方法測定結(jié)果與與乳酸脫氫酶紫外動力學(xué)法結(jié)果相比具有較好的一致性。 7、同步檢測的結(jié)果與全自動生化分析儀結(jié)果相關(guān)性都在0.95以上，系統(tǒng)比例誤差和恒定誤差都在可接受的范圍內(nèi)，兩方法具有較好的一致性。 結(jié)論： 1、通過對方法的改進(jìn)和改良，研制出了可結(jié)合多項生化板一步法測定血糖血脂和肝功的干試劑。 2、初步建立的血糖血脂和肝功