快速檢測(cè)試劑條、鏡檢和PCR在瘧疾診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的:采用鏡檢、RDT和PCR三種檢測(cè)方法對(duì)網(wǎng)報(bào)瘧疾病例復(fù)核檢測(cè),比較三種方法在瘧疾診斷中的敏感性、特異性,為科學(xué)地分析判斷復(fù)核檢測(cè)結(jié)果,以及RDT能否在基層替代瘧原蟲(chóng)鏡檢提供依據(jù)。RDT檢測(cè)時(shí),同時(shí)使用進(jìn)口和國(guó)產(chǎn)RDT兩種產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè),通過(guò)比較兩種產(chǎn)品的敏感性、特異性,為監(jiān)測(cè)工作中產(chǎn)品選擇的可行性提供依據(jù)。動(dòng)態(tài)觀察瘧疾病例鏡檢、PCR和RDT的檢測(cè)陰轉(zhuǎn)時(shí)間,以及經(jīng)治療后瘧疾病人鏡檢原蟲(chóng)的密度隨時(shí)間的變化,為瘧疾監(jiān)測(cè)和防治工作提供科學(xué)的

2、理論依據(jù)。
　　方法:收集安徽省2012年1月~2013年9月中國(guó)疾病預(yù)防控制信息傳染病報(bào)告系統(tǒng)的網(wǎng)報(bào)267例瘧疾病例的血片、抗凝血,病例報(bào)告類(lèi)型包括實(shí)驗(yàn)室、臨床和疑似三種;50例非瘧疾病人血樣,來(lái)自芙蓉社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心。267例流行病學(xué)調(diào)查表來(lái)自寄生蟲(chóng)病防治信息管理系統(tǒng)。對(duì)血片和抗凝血分別進(jìn)行鏡檢、RDT和PCR檢測(cè),并將快速檢測(cè)試劑條的結(jié)果與鏡檢法和PCR的結(jié)果對(duì)比分析其敏感性與特異性。收集安徽省立醫(yī)院及肥東縣人民醫(yī)院2013

3、年5月~2013年9月瘧疾住院病人37例,確診后連續(xù)采血7天,若病人治愈出院、轉(zhuǎn)院等情況,以鏡檢與PCR結(jié)果有轉(zhuǎn)陰時(shí)間為標(biāo)準(zhǔn),納入研究范圍。使用EDTA管采集血樣,并對(duì)病人進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。每天采血后立即涂制血片,同時(shí)做RDT,并提取DNA準(zhǔn)備做PCR。采用三種方法進(jìn)行檢測(cè),觀察不同檢測(cè)方法的陰轉(zhuǎn)時(shí)間,經(jīng)SPSS11.5軟件統(tǒng)計(jì)分析,采用非參數(shù)檢驗(yàn)(nonparametric tests)中的Wilcoxon檢驗(yàn)比較,P<0.05認(rèn)為差

4、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:收集267例網(wǎng)報(bào)病例的血片,鏡檢復(fù)核瘧原蟲(chóng)陽(yáng)性148例,陽(yáng)性率為55.43％,其中惡性瘧117例,間日瘧20例,卵形瘧10例,三日瘧1例;267例抗凝血樣采用PCR法檢測(cè),瘧原蟲(chóng)陽(yáng)性者150例,陽(yáng)性率為56.18%,其中惡性瘧119例(包括鏡檢檢出的117例),間日瘧20例,卵形瘧10例,三日瘧1例;采用進(jìn)口RDT試劑對(duì)267份抗凝血血樣進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)出147例陽(yáng)性,陽(yáng)性率為55.06%,其中非惡性瘧2

5、1例(包括鏡檢和PCR均檢為間日瘧的19例和鏡檢和PCR均檢為惡性瘧的2例),惡性瘧126例(包括鏡檢為惡性瘧的114例,另12例鏡檢陰性;PCR檢為惡性瘧116例,另10例PCR檢為陰性),因此,RDT未檢出1例間日瘧和1例惡性瘧,并將2例惡性瘧檢為非惡性瘧,10例PCR和鏡檢均檢為陰性的病例檢為惡性瘧,10例卵形瘧和1例三日瘧均未檢出;50例非瘧疾病人RDT、鏡檢和PCR檢測(cè)均為陰性。以鏡檢為標(biāo)準(zhǔn),對(duì)間日瘧和惡性瘧進(jìn)行分析得出,RD

6、T的敏感度為98%,特異度90%,假陽(yáng)性率10%,假陰性率2%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值92%,陰性預(yù)測(cè)值98%;以PCR為標(biāo)準(zhǔn),對(duì)間日瘧和惡性瘧進(jìn)行分析得出,RDT的敏感度為98%,特異度91%,假陽(yáng)性率9%,假陰性率2%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值93%,陰性預(yù)測(cè)值98%。采用國(guó)產(chǎn)RDT檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性143例,陰性124例,其中非惡性瘧18例,惡性瘧125例(包括進(jìn)口RDT檢為惡性瘧的123例,另2例進(jìn)口RDT檢為非惡性瘧,但是鏡檢和PCR均檢為惡性瘧)。因此,

7、國(guó)產(chǎn)RDT未檢出3例惡性瘧和1例間日瘧,卵形瘧和三日瘧均未檢出。將國(guó)產(chǎn)RDT的檢測(cè)結(jié)果與進(jìn)口RDT結(jié)果進(jìn)行比較,兩方法配對(duì)卡方檢驗(yàn)結(jié)果表明兩方法差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2=4.000,P>0.05),Kappa檢驗(yàn)結(jié)果P<0.001,且Kappa值0.97,提示兩方法高度一致。動(dòng)態(tài)采集37例確診瘧疾病人血樣,鏡檢轉(zhuǎn)陰時(shí)間1～5天,中位數(shù)為2天;PCR轉(zhuǎn)陰時(shí)間1～6天,中位數(shù)為3天,經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)(nonparametric tests)中的W

8、ilcoxon檢驗(yàn)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=3.776,P<0.05),PCR轉(zhuǎn)陰時(shí)間約比鏡檢長(zhǎng)1天;RDT的陰轉(zhuǎn)時(shí)間長(zhǎng)于7天。37例病例鏡檢結(jié)果轉(zhuǎn)陰時(shí)間為1～5天不等,16例病人第二天即轉(zhuǎn)陰,其中1天后陰轉(zhuǎn)病例密度中位數(shù)為3571/μl血(267/μl血,38790/μl血),2～5天后陰轉(zhuǎn)病例密度中位數(shù)分別為第1天38385/μl血、第2天11456/μl血及第3天147/μl血,呈下降趨勢(shì)。
　　結(jié)論:本研究結(jié)果表明,課題

9、使用RDT產(chǎn)品無(wú)法檢出卵形瘧和三日瘧;對(duì)于惡性瘧和間日瘧,RDT與鏡檢和PCR相比,RDT的敏感性和特異性均較高。由于PCR在基層較難普及,而鏡檢對(duì)技術(shù)的要求較高而且人員培訓(xùn)周期長(zhǎng)等原因,RDT有望在基層取代鏡檢進(jìn)行瘧疾監(jiān)測(cè)。國(guó)產(chǎn)RDT敏感性和特異性也較高,可以在基層取代進(jìn)口 RDT進(jìn)行瘧疾病例監(jiān)測(cè)工作。三種方法RDT的有效檢測(cè)時(shí)間最長(zhǎng),長(zhǎng)于7天,PCR次之,約為3天,鏡檢陰轉(zhuǎn)時(shí)間約為2天,PCR陰轉(zhuǎn)時(shí)間一般比鏡檢遲1天,為瘧疾病例復(fù)核