左型精氨酸與褪黑激素對大鼠腎臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及對一氧化氮合成酶的影響.pdf

1、目的:腎移植缺血再灌注損傷(IRI)主要臨床表現(xiàn)為移植腎功能延遲恢復(fù)(DGF)，它是影響腎移植術(shù)后近期及遠(yuǎn)期人腎存活率的重要危險因素。近年來NO系統(tǒng)在IRI中的作用越來越受到國內(nèi)外學(xué)者的重視，NO是一種內(nèi)源性的血管擴(kuò)張因子，對自由基的產(chǎn)生和清除也扮演著重要的角色，NO由一氧化氮合成酶nitric oxide synthases(NOS)合成，NOS又可分為iNOS(inducible nitric oxidesynthase誘生型一氧化

2、氮合成酶)、eNOS(endothelial initric 0xde synthase內(nèi)皮型一氧化氮合成酶)、nNOS(neuronal NOS神經(jīng)元型一氧化氮合成酶)，這三種酶都在腎臟組織中被發(fā)現(xiàn)。其中，iNOS和eNOS在腎缺血再灌注損傷中起主要作用，iNOS來源的NO被認(rèn)為與IRI的病理損傷有關(guān)，而eNOS對維持血流動力學(xué)穩(wěn)定及內(nèi)環(huán)境動態(tài)平衡有重要作用。．研究表明，在IRI中，iNOS和eNOS比例失衡，具體表現(xiàn)為iNOS相對增

3、高和eNOS相對降低。本實(shí)驗(yàn)旨在通過建立大鼠腎臟缺血再灌注損傷模型，比較分析不同實(shí)驗(yàn)組與對照組術(shù)前及術(shù)后1、3、5天的血肌酐、iNOS、eNOS的變化規(guī)律和腎臟病理組織學(xué)改變，探討左型精氨酸與褪黑激素對iNOS與eNOS的影響，iNOS與eNOS在腎臟缺血再灌注損傷中的作用，為指導(dǎo)今后的實(shí)驗(yàn)研究及其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。 方法:健康雄性清潔級SD大鼠60只，將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為ABCD4個組，每組15例。A組：對照組；B組：左型精

4、氨酸(L-Arginine)治療組，500 mg/kg腹腔內(nèi)注射，第一次為術(shù)前1h，以后每天一次，連續(xù)5天； C組：褪黑激素(Melatonin)治療組，10 mg/kg腹腔內(nèi)注射，用法同上； D組：褪黑激素與左型精氨酸聯(lián)合治療組，用法同上。分析比較各組術(shù)前及術(shù)后．1、3、5天的血肌酐，并于上述各時間點(diǎn)處死部分動物切取腎臟，免疫組化方法檢測術(shù)前及術(shù)后iNOS、eNOS，并用圖像分析技術(shù)對其進(jìn)行定量分析，同時分析比較各組腎臟病理組織學(xué)變化

5、。 結(jié)果:B組、C組與D組術(shù)后第3天和第5天血肌酐水平顯著低于A組，D組第1天血肌酐水平顯著低于A組，B組、C組第1天血肌酐水平與A組無顯著性差異。A組eNOS的表達(dá)：術(shù)后第1天與術(shù)前相比略有升高，第3天顯著降低，第5天仍略低于術(shù)前；iNOS的表達(dá)：術(shù)后第1天與術(shù)前相比顯著升高，第3天達(dá)到高峰，第5天仍高于術(shù)前。B組eNOS的表達(dá)：術(shù)后第i天與A組相比略有升高，第3天與第5天顯著高于A組；iNOS的表達(dá)與A組相比略有降低，但無統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)意義。C組eNOS的表達(dá)與A組相比略有升高，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，iNOS的表達(dá)：術(shù)后第1天與A組相比略有降低，第3天與第5天顯著低于A組。D組eNOS的表達(dá)：術(shù)后第1天與A組相比略有升高，第3天與第5天顯著高于A組；iNOS的表達(dá)：術(shù)后第1天與A組相比略有降低，第3天與第5天顯著低于A組。血肌酐水平分別與eNOS和iNOS的表達(dá)作相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血肌酐水平與iNOS的表達(dá)呈正相關(guān)，r=0.57，p<0.01，血肌酐水平與eNOS/iNOS

7、呈負(fù)相關(guān)，r=-0.61．p<0.0l。病理組織學(xué)觀察：A組腎小球結(jié)構(gòu)變化不明顯，多數(shù)腎小管擴(kuò)張、上皮細(xì)胞渾濁腫脹，部分凝固性壞死、脫落，刷狀緣消失，管腔內(nèi)可見管型。腎間質(zhì)水腫，炎細(xì)胞浸潤，局部有出血， B組、C組與A組比較病變有所改善，D組與A組比較病理改變明顯減輕。腎小管損傷Paller法評分：B組、C組、D組顯著低于A組，依次為D組