一例人體寄生包蟲以及我國不同地區(qū)包蟲的鑒定.pdf

1、棘球絳蟲的中間宿主十分廣泛,包括人、家畜及野生動物如牦牛、藏羊、鼠及駱駝等,引起重要的人獸共患寄生蟲病--包蟲病。我國廣大牧區(qū)動物種群龐大,種類復雜,西北地區(qū)由于地理位置特殊,是高海拔、低氣壓的寒冷地域。以畜牧業(yè)為主的縣、市、自治州都是棘球蚴病的高發(fā)地區(qū)。2006年在青海省治多縣的棘球蚴病調查結果顯示:ELISA檢測931份人血清,抗體陽性者76例,陽性率為8.2％.由于我國政府的高度重視及大力控制,人和家畜棘球蚴感染率在某些地區(qū)逐年下

2、降,但在一些特定地區(qū),如某些少數民族有特殊的宗教習俗,導致其終宿主犬類種群數量明顯增加,包蟲病成為嚴重的地方性流行病。此外,隨著交通條件的改善,經濟貿易頻繁,人員流動大,大量疫區(qū)犬和家畜向外輸出,勢必加重棘球蚴病的流行。 棘球絳蟲的幼蟲是人、畜包蟲病的病原體,棘球絳蟲在動物分類學上屬于絳蟲綱(Cestoda)、圓葉目(Cyelophyllidea)、帶科(Taeniidae)、棘球絳蟲屬(Genus Echinococcus)。

3、該屬現有4個公認獨立的種,即細粒棘球絳蟲(Echinococcus granulosus)、多房棘球絳蟲(E.multilocularis)、少節(jié)棘球絳蟲(E.oligarthrus)、福氏棘球絳蟲(E.vogeli),后兩者主要分布在美洲,國內尚未見報道。此外,我國唐崇惕院士收集了我國內蒙古東北部動物體內的棘球絳蟲,經過多年的生物學研究,將原名多房棘球絳蟲西伯利亞亞種(E.multilocularis sibiricensis)修訂為

4、西伯利亞棘球絳蟲(E.sibiricensis),將原名棘球絳蟲哈薩克亞種(E.m.kazakhensis)修訂為蘇俄棘球絳蟲(E.russicensis),將原名多房棘球絳蟲指名亞種(E.m.multilocularis)修訂為多房棘球絳蟲(E.multilocularis)。上世紀90年代在我國四川和青海動物體內發(fā)現的棘球絳蟲,因其成蟲與幼蟲形態(tài)特殊,根據分子序列不同命名為石渠棘球絳蟲(E.shiquicus)。 2006年

5、我校附屬醫(yī)院發(fā)現一例來自新疆被診斷為小網膜腫瘤的病人,從切除的腫塊剖面見有呈蜂窩狀的“粉皮樣”結構,類似棘球蚴,但其大體結構和組織形態(tài)與常見棘球蚴囊有所不同,未見原頭節(jié)等特點。懷疑為多房棘球絳蟲,或未知種類棘球屬幼蟲感染。 為探明該患者腫塊的性質,以及我國不同地區(qū)新命名的棘球絳蟲的相互關系,本研究以福爾馬林固定的病人手術切除標本(CHEm)和采自新疆細粒棘球蚴病人手術切除標本(XJ-Eg)、小鼠保種的多房棘球蚴伊犁株(YL-Em

6、)、采自四川石渠縣的兩種動物宿主肝臟的未定種包蟲：高原鼠兔肝臟標本(133、317)和青海田鼠肝臟標本(422、450),以及采自內蒙的3種多房棘球絳蟲在小鼠腹腔保種的酒精浸泡標本：西伯利亞棘球絳蟲(E.sibiricensis,標本號I)、蘇俄棘球絳蟲(E.russicensis,標本號II)、多房棘球絳蟲(E.multilocularis,標本Ⅲ)為材料,以分子生物學方法對不同來源標本進行鑒定。此外,還對本校附屬醫(yī)院發(fā)現的病人標本先

7、后進行了形態(tài)學、ELISA、免疫組化和部分分子標志測序分析。該“腫塊”組織大小10 cm×6 cm×9 cm,剖開腫塊擠壓出“膠凍”樣成分,肉眼見為多囊結構,“粉皮”樣組織呈層疊迂回分布,有些呈蜂巢狀；顯微鏡下觀未見原頭節(jié),生發(fā)層襯于“粉皮”的一側,有些在兩側,有些不連續(xù)。周圍結締組織中可見散在深染的胚細胞；用多房棘球蚴囊液抗原對病人血清進行ELISA檢測呈強陽性；用兔抗細粒棘球蚴囊液的多克隆抗體進行免疫組化分析,可見陽性反應的棕黃色位

8、于粉皮樣結構的一側、雙側、壞死組織和周圍組織中。 采用真核生物18S核糖體小亞基(18S rRNA)序列通用引物(1520RPL、FPL)對各標本基因組DNA進行PCR擴增,所得片段的序列與GenBanK中已有序列比對。結果CHEm標本PCR擴增序列與細粒棘球絳蟲18S rRNA序列相似性93％；用根據細粒棘球絳蟲線粒體ND1序列設計的引物(ND1、ND1r)進行PCR擴增,擴增序列比對發(fā)現,CHEm ND1序列與細粒棘球絳蟲最

9、為接近,序列相似性為99％。其余各地標本XJ-Eg、YL-Em、450、422、317、133、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的18S rRNA序列經與GenBanK中已有序列比對,發(fā)現均與細粒棘球絳蟲相似性最高,分別為：97％、92％、93％、93％、92％、92％、92％、93％、93％；ND1序列與GenBanK中已有序列比對,結果分別為:XJ-Eg與細粒棘球絳蟲ND1序列相似性最高為99％；422、450與多房棘球絳蟲ND1序列相似性最高為99％；

10、317、133ND1序列與石渠棘球絳蟲序列相似性為98％；標本Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ與多房棘球絳蟲ND1序列相似性均為98％。 結合免疫組化結果,認為CHEm為細粒棘球蚴非正常寄生或變異型?？赡茉摪x生長在胃壁外,血供較差,與在組織內寄生時內環(huán)境有一定差異。用1520RPL、FPL引物對標本擴增所得3條18S序列,比對結果均與細粒棘球絳蟲18S序列相似性最高(GenBanK中尚未收錄除細粒棘球絳蟲以外的棘球屬絳蟲18S rRNA序列)。根據

11、ND1序列比對結果,本研究不同地區(qū)的標本可分為以下四組：第一組為內蒙古大興安嶺的3種多房棘球絳蟲(標本號Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),在系統發(fā)育進化樹中的位置單成一組,與多房棘球絳蟲近緣；第二組多房棘球絳蟲,標本號為YL-Em、450、422;第三組石渠棘球絳蟲,標本號為317、133;第四組細粒棘球絳蟲,即XJ-Eg,CHEm也歸在此組中。 本研究先后用真核生物通用引物擴增相對保守的18S序列,用棘球屬特異引物擴增線粒體ND1序列,成功地區(qū)分