麻黃湯中麻黃生物堿體內(nèi)代謝排泄的研究.pdf

1、本論文以麻黃湯為工具方，通過(guò)對(duì)麻黃湯煎液、人體服用麻黃湯后血漿及尿液中麻黃生物堿的分析，探討麻黃湯中麻黃生物堿的體內(nèi)代謝排泄變化規(guī)律，以期闡明麻黃湯發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。目的： 探討健康人體口服中藥復(fù)方麻黃湯后，麻黃生物堿(包括E、PE、ME、NME和NMP)在人體內(nèi)的代謝和排泄變化規(guī)律，闡明麻黃湯發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。 方法： 1．以計(jì)算機(jī)檢索、手工追溯檢索等手段相結(jié)合，充分利用中國(guó)學(xué)術(shù)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)、PubMed

2、、SienceDirect、SpringerLINK、CA、Toxnet等數(shù)據(jù)庫(kù)，廣泛查閱有關(guān)麻黃湯及麻黃生物堿的藥理作用、毒副作用、生物轉(zhuǎn)化、代謝和排泄的研究資料。 2．以《傷寒論》中麻黃湯的制備方法為基礎(chǔ)，結(jié)合現(xiàn)代研究及臨床用藥習(xí)慣，確定麻黃湯煎液的制備方法。按此法分別制備麻黃湯煎液和單味麻黃煎液。4名健康志愿者頓服同體積的麻黃湯煎液，采集服藥后2h的血漿及服藥后0-24h不同時(shí)間點(diǎn)的尿液，采用GC-MS法研究麻黃湯煎液、單

3、味麻黃煎液以及收集的血漿和尿液中麻黃生物堿的變化。 3．運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(Independent-Samples TTest)的方法分別分析比較經(jīng)相同方法制備的麻黃湯煎液與單味麻黃煎液中各麻黃生物堿的濃度及含量；采用單樣本t檢驗(yàn)(One-sample T Test)的方法來(lái)分析比較人口服麻黃湯煎液24h后麻黃生物堿在尿液中的累積排泄量與口服量的關(guān)系，以及累積排泄率與1的關(guān)系；采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差

4、分析(RepeatedMeasures)的方法，分別分析比較了NMP、NME、E、PE和ME在不同時(shí)間點(diǎn)的排泄量。 4．以各麻黃生物堿在尿液中平均累積排泄量和平均累積排泄率，描述各麻黃生物堿在尿液中的排泄情況。 結(jié)果： 1．利用多種檢索工具和中英文數(shù)據(jù)庫(kù)，查閱文獻(xiàn)百余篇。了解到對(duì)中藥復(fù)方進(jìn)行代謝研究有利于揭示藥效物質(zhì)基礎(chǔ)；了解到麻黃湯在發(fā)汗、平喘方面的作用與君藥麻黃的主要成分麻黃生物堿的作用具有相關(guān)性；了解到國(guó)內(nèi)

5、外對(duì)麻黃湯及麻黃的代謝排泄研究較少，而針對(duì)單個(gè)麻黃生物堿的體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化的報(bào)道較多。 2．GC-MS法檢測(cè)麻黃湯煎液、單味麻黃煎液、血漿和尿液中的麻黃生物堿，24min內(nèi)NMP、NME、E、PE和ME達(dá)到良好分離，且方法準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，專屬性和重現(xiàn)性好。 3．麻黃湯煎液中NMP、NME、E、PE和ME的平均濃度分別為13.27μg·mL<'-1>，9.83μg·mL<'-1>，295.31μg·mL<'-1>，79.2

6、6μg·mL<'-1>，18.66μg·mL<'-1>，平均含量分別為4.38mg，3.24mg，97.45mg，26.15mg，6.16mg；單味麻黃煎液中各堿的平均濃度分別為16.67μg·mL<'-1>，11.96μg·mL<'-1>，321.52μg·mL<'-1>，87.99μg·mL<'-1>，19.55μg·mL<'-1>，平均含量分別為6.42mg，4.61mg，123.79mg，33.88mg，7.53mg。麻黃湯煎液

7、中各堿的濃度及含量顯著低于單味麻黃煎液中的各堿的濃度及含量(P<0.05)。 4．人口服麻黃湯煎液2h后的血漿中存在E、PE和ME，其平均濃度分別為186.57ng·mL<'-1>、32.45 ng·mL<'-1>和22.62 ng·mL<'-1>。未能檢測(cè)到NMP和NME。人體口服麻黃湯后2h，血漿的移行成分有E、PE及ME。 5．時(shí)間因素能顯著影響麻黃生物堿的排泄(P<0.001)。E和PE在4-8h排泄最快，NMP

8、、NME和ME在49-6h排泄最快；平均累積排泄量-時(shí)間曲線圖反映出在服藥后各時(shí)間段E排泄最快，ME排泄最慢。 6．志愿者口服麻黃湯煎液24h后，尿液中NMP、NME、E、PE和ME的平均累積排泄量分別為5．20mg，9.46mg，68.39mg，23.73mg，2.35mg，平均累積排泄率分別為118.85％，291.97％，70.18％，90.75％，38.10％。其中NMP和NME的累積排泄量大于口服量(P<0.05)，且

9、兩者的累積排泄率均大于1(P<0.05)。 結(jié)論： 1．麻黃湯煎液中含有NMP、NME、E、PE和ME五種麻黃生物堿，其含量及濃度均低于單味麻黃煎液，提示麻黃配伍桂枝、杏仁和甘草能降低麻黃生物堿的煎出量。在麻黃湯煎液和單味麻黃煎液中，麻黃生物堿以E含量最高，其次是PE，另外還含有少量的NMP、NME和ME。 2．人口服麻黃湯煎液后2h，E、PE和ME已被吸收入血，然后一部分的E、PE和ME以原形代謝，一部分發(fā)生相

10、互轉(zhuǎn)化。結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道，推測(cè)人口服麻黃湯后麻黃生物堿在人體內(nèi)的代謝行為，即E主要以原形代謝，小部分代謝為NME；PE主要以原形代謝，另有小部分轉(zhuǎn)化為NMP；ME除一部分以原形代謝外，還有一部分代謝為E，然后轉(zhuǎn)化為NME；NME和NMP主要以原形代謝。血清藥理學(xué)的研究證實(shí)中藥復(fù)方藥效產(chǎn)生的物質(zhì)基礎(chǔ)是血液中的化學(xué)成分，因此E、PE和ME可能是麻黃湯發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。 3．人口服麻黃湯煎液后，除小一部分的ME以原形排泄外

11、，NMP、NME、E和PE則主要以原形排泄，通過(guò)腎臟從尿液中排出。人口服麻黃湯煎液后4-6h，各麻黃生物堿通過(guò)尿液排泄的快慢依次為：E>PE>NME>NMP>ME。且在0-24h各時(shí)段，E排泄最快，ME排泄最慢。這一結(jié)果支持了麻黃湯發(fā)汗迅速、平喘持久的藥理作用。 4．本課題組分別建立了不經(jīng)衍生化而直接用GC-MS法同時(shí)分離并測(cè)定麻黃湯煎液及單味麻黃煎液、口服麻黃湯煎液后血漿和尿液中麻黃生物堿的含量的方法。方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好