間歇性低氧對(duì)小鼠非酒精性脂肪肝形成的影響.pdf

1、目的：
　　研究觀察間歇性低氧對(duì)小鼠非酒精性脂肪肝形成的影響及其機(jī)制，為臨床預(yù)防和治療非酒精性脂肪肝探索新的方法和途徑。
　　方法：
　　1、采用高脂高糖飲食誘發(fā)小鼠非酒精性脂肪肝模型；以肝細(xì)胞AMPK活性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選和確定低氧（15％）環(huán)境的刺激的作用和起效時(shí)間；常規(guī)病理學(xué)方法判定病變程度，對(duì)比觀察間歇性低氧和二甲雙胍對(duì)小鼠非酒精性脂肪肝病理學(xué)進(jìn)程的影響；
　　2、實(shí)驗(yàn)分組與步驟：
　?。?）高脂高糖

2、誘發(fā)脂肪肝模型的復(fù)制：封閉群 Km雄性小鼠30只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組和高脂高糖模型組，每周測(cè)量體重變化及肉眼觀察肝脂肪變程度，直至模型成功；
　?。?）15%低氧環(huán)境刺激的起效時(shí)間篩選：Km雄性小鼠25只，隨機(jī)分成5組，普通飼料喂養(yǎng)。低氧1 h組、低氧2 h組、低氧4 h組、正常對(duì)照組和二甲雙胍對(duì)照組。三個(gè)低氧組置氧濃度為15%環(huán)境中分別刺激1 h、2 h、4 h，二個(gè)對(duì)照組置常氧環(huán)境普通飼料喂養(yǎng)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，麻醉處死后Wester

3、n blotting檢測(cè)肝臟AMPKa活性，篩選確定低氧干預(yù)的起效時(shí)間。
　　（3）間歇性低氧干預(yù)對(duì)小鼠非酒精性脂肪肝病理進(jìn)程的影響：Km雄性小鼠48只，隨機(jī)分為4組，A.空白對(duì)照組、B.高脂高糖模型組、C.低氧干預(yù)組、D..二甲雙胍對(duì)照組，每周1次稱量并記錄體重變化。除A組普通飼料常氧飼養(yǎng)外，B、C、D三組均全程高脂高糖飼料喂養(yǎng)。第5周起，B組每天1次暴露于21%常氧環(huán)境中1 h，C組每天一次暴露于15%低氧環(huán)境中1 h，D組每

4、天1次腹腔注射二甲雙胍（100mg/kg體重/d），常氧飼養(yǎng)。第8周末麻醉處死動(dòng)物，采取血液和肝組織標(biāo)本，分別檢測(cè)血糖、肝功能指標(biāo)變化及制作肝組織HE染色切片和常規(guī)病理學(xué)觀察。
　　結(jié)果：
　　1、采用高脂高糖飲食誘導(dǎo)4周，成功復(fù)制小鼠非酒精性脂肪肝模型；
　　2、置15%低氧環(huán)境1 h即可激活肝P-AMPKa活性，確定為后續(xù)實(shí)驗(yàn)條件；
　　3、間歇性低氧對(duì)小鼠非酒精性脂肪肝進(jìn)程的影響：
　?。?）常規(guī)病理

5、學(xué)觀察結(jié)果：A組無(wú)肝脂肪變，C、D組有輕中度脂肪變，B組有嚴(yán)重脂肪變，B組與C、D兩組比較均有顯著性差異（P＜0.05），但C、D兩組間差異不明顯，提示間歇性低氧有效減緩了非酒精性脂肪肝的病理進(jìn)程。
　　（2）肝功能檢測(cè)結(jié)果：血清ALT值：與A組比較，C、D組均輕度升高，B組顯著性升高（P＜0.05）；與B組比較，C、D二組均降低，差異均有顯著性（P＜0.05）；而C、D兩組間比較，差異無(wú)顯著性；血清AST值：與A組比較，C、D二

6、組輕度升高，B組最高； B組與A、C、D三組比較差異均有顯著性意義（P＜0.05），但是A、C、D三組間兩兩比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明間歇性低氧明顯降低了高脂高糖飲食所致的肝功能損害。
　　（3）平均體重變化：A組隨時(shí)間正常增長(zhǎng)，B組增長(zhǎng)極其緩慢，C、D組介于A、B組之間；第5周起，A組、B組分別與C、D兩組的比較差異逐周加大，至第8周最大，差異均有顯著性意義（p＜0.05）； C、D兩組的變化一直相近，兩組間比較無(wú)明顯差異。<

7、br>　?。?）血糖、血脂檢測(cè)結(jié)果：空腹血糖值：A組最高，C、D組次之，B組最低，A組與B、C、D三組比較差異均有顯著性（P＜0.05），但C、D組之間比較無(wú)明顯差異。血清TG：B、C、D三組均較A組高，與A組兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），但B、C、D三組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清TC值：與A組相比，B組升高、C、D二組最高，差異均有顯著性意義（P＜0.05），但C、D兩組之間比較無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論：