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文檔簡介
1、目的:近年,非酒精性脂肪性肝病(nonalconholicfattyliverdisease,NAFLD)的發(fā)病率逐年升高,其發(fā)病與2型糖尿病,高脂血癥,胰島素抵抗密切相關(guān)。非酒精性脂肪肝發(fā)病機制尚未完全明確,但很多研究提示氧化應激、線粒體功能紊亂在疾病發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用。普羅布考是作用較強的抗氧化劑之一。本實驗旨在研究線粒體功能紊亂在大鼠非酒精性脂肪肝中的作用,觀察普羅布考的干預效果并探討其機制,確立氧化應激在非酒精性脂肪性肝病
2、發(fā)病機制中的重要作用。 方法:健康雄性SD大鼠24只,體重210±10克,隨機分成三組:正常對照組(NC組)8只,喂飼標準鼠食:模型組(HF組)和普羅布考干預組(PB組)各8只,喂飼高脂飼料。PB組給予普羅布考500mg/(kg.d)灌胃,其余兩組灌以相當體積羧甲基纖維素鈉溶液。各組動物喂養(yǎng)至18周末處死取材。稱量肝臟濕重計算肝指數(shù)(肝濕重/體重×100%)。測定血清ALT、AST、TG、TC以及肝組織勻漿TG、TC和FFA,測
3、定血清和肝線粒體MDA、SOD、GSH-PX等脂質(zhì)過氧化標志物和抗氧化物質(zhì)水平,并計算血清SOD/MDA,測定肝組織ATP酶,熒光分光光度計法測定線粒體膜電位。常規(guī)制備HE染色,光鏡觀察肝臟病理變化,并用透射電鏡觀察肝細胞超微結(jié)構(gòu),免疫組化觀察UCP2蛋白表達情況,RT-PCR檢測肝組織UCP2、PPARγ表達情況。所有數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包分析。 結(jié)果:喂養(yǎng)18周后,NC組大鼠肝細胞結(jié)構(gòu)大致正常,HF組大鼠肝臟重度
4、脂肪變,并出現(xiàn)輕到中度炎癥浸潤和點片狀或灶狀壞死及纖維化,透射電鏡觀察顯示線粒體部分或大部分脊與膜融合或消失,PB組大鼠肝臟普通病理學以及超微病理學損害也較HF組顯著減輕。與NC組相比,HF組大鼠肝濕重、肝指數(shù)、血清ALT和AST水平、TC、LDL-c顯著升高(P<0.05),HDL-c顯著降低(P<0.05),肝組織勻漿FFA含量顯著升高(P<0.05);PB組血清TC、LDL-c和肝組織勻漿FFA分別較HF組降低33.1%、21.5
5、%和13.9%(P<0.05)。與NC組相比,HF組大鼠血清和肝線粒體MDA水平都顯著升高(P<0.05),肝線粒體SOD、GSH-PX和血清SOD/MDA顯著降低(P<0.05)。與HF相比,PB組血清和肝線粒體MDA水平都顯著降低,血清SOD、SOD/MDA和肝線粒體SOD、GSH-PX都顯著升高(P<0.05)。HF組肝線粒體Na-KATP酶、Ca-MgATP酶顯著低于NC組(P<0.05),PB組肝線粒體Na-KATP酶、Ca-
6、MgATP酶較HF組顯著升高(P<0.05),但是仍顯著低于NC組。在NC組大鼠肝組織UCP2偶在庫普弗細胞染色呈陽性,未見肝細胞陽性染色;HF組UCP2陽性細胞數(shù)和UCP2mRNA表達較NC組明顯增強;PB組較HF組明顯減少(P<0.05)。HF組PPARγmRNA較NC組表達明顯增強,PB組PPARγmRNA較HF組明顯減少(P<0.05)。 結(jié)論:本實驗成功制備了大鼠非酒精性脂肪肝模型,非酒精性脂肪肝大鼠存在明顯線粒體功能
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