MAPK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺發(fā)育中的表達分析.pdf

1、絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activatedproteinkinases，MAPK)信號途徑在真核細(xì)胞基因表達、細(xì)胞增殖、分化、凋亡、新陳代謝等生理病理過程中發(fā)揮著重要的作用。通過遠緣雜交、雌核發(fā)育操作技術(shù)已經(jīng)成功研制出不同倍性經(jīng)濟魚類，其中雌核發(fā)育二倍體鯽鯉具有產(chǎn)生二倍體卵子的現(xiàn)象。不減數(shù)配子的形成可能與生殖細(xì)胞的核內(nèi)復(fù)制或生殖細(xì)胞的細(xì)胞融合有關(guān)。
　　本實驗以雌核發(fā)育二倍體鯽鯉為材料，研究MAPK家族的主要成員ERK

2、和JNK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺中的表達分析，為進一步解析雌核發(fā)育二倍體鯽鯉不減數(shù)配子發(fā)生中的分子調(diào)控機制奠定基礎(chǔ)。具體研究內(nèi)容如下:
　　(1)根據(jù)已知物種斑馬魚erk1基因的cDNA序列，克隆了紅鯽、三倍體湘云鯽、異源四倍體鯽鯉和雌核發(fā)育二倍體鯽鯉中erk1基因的編碼區(qū)中間片段序列，測序得到709bp的中間段序列，其中雌核發(fā)育二倍體鯽鯉與二倍體紅鯽、三倍體湘云鯽，異源四倍體鯽鯉和斑馬魚erk1基因編碼區(qū)中間片段的相似性分別為9

3、9.7％、99.7％、96.3％、91.9％。
　　(2)運用Western-blot技術(shù)檢測JNK、p-JNK、ERK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉和不同倍性魚性腺組織中表達分析。結(jié)果顯示，JNK、ERK在魚類性腺組織中均有較高量的表達，但在魚類卵巢和精巢間、雌核發(fā)育二倍體鯽鯉和不同倍性魚的性腺組織間，JNK或ERK的表達量并不存在明顯的差異。值得關(guān)注的是，P-JNK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺中的表達量遠高于三倍體和四倍體鯽鯉的卵巢組織。<

4、br>　　(3)對雌核發(fā)育二倍體鯽鯉早期性腺的組織學(xué)觀察表明，6～10月齡雌核發(fā)育二倍體鯽鯉的性腺處于Ⅰ期卵巢發(fā)育階段。8～10月齡的雌核發(fā)育二倍體鯽鯉的性腺中均可觀察到性原細(xì)胞旺盛的分裂。運用Western-blot技術(shù)檢測JNK、ERK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉早期性腺發(fā)育的表達。結(jié)果顯示10月齡雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺中JNK表達水平較6、8月齡的要高。ERK在6、8、10月齡的雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺的表達成下調(diào)趨勢。
　　(4)采

5、用免疫組織化學(xué)檢測了ERK和JNK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉早期性腺組織中的表達。結(jié)果顯示JNK和ERK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉早期性腺中有陽性表達。其中JNK在10月齡雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺中的陽性反應(yīng)強度高于6、8月齡。而ERK在8月齡和10月齡的性腺中的陽性反應(yīng)則弱于6月齡。這與Western-blot技術(shù)檢測結(jié)果相一致。
　　綜上所述，本研究探討了MAPK信號傳導(dǎo)通路，尤其是JNK、ERK在雌核發(fā)育二倍體鯽鯉性腺中的功能，結(jié)果表明M