擬南芥開花調(diào)控基因FVE和EFS1的克隆與功能初步分析.pdf

1、本研究從擬南芥Columbia生態(tài)型的T-DNA插入突變體庫中篩選得到1株晚花突變體(編號為221-1)和1株早花突變體(編號為426-2)，晚花突變體221-1葉片大而肥厚，蓮座葉片數(shù)量多，營養(yǎng)生長期顯著延長，開花時間延遲60 d左右。早花突變體426-2在短日照下葉面積小，蓮座葉片數(shù)量少，抽苔后花莖分支數(shù)多，葉片數(shù)量增多，抽苔時間和開花時間都比野生型早10d左右。通過Southern雜交確定其T-DNA插入拷貝數(shù)均為單拷貝。

2、 試驗對TAIL-PCR的影響因素進行了優(yōu)化，并利用優(yōu)化的TAIL-PCR條件擴增了晚花突變體221-1 T-DNA插入位點的側(cè)翼序列。將所獲得序列與TAIR(The Arabidopsis Information Resource)中基因序列進行同源性比對，確定了突變體221-1中的突變基因為AT2G19520.1基因(晚花相關(guān)基因)，明確了該基因是自主開花途徑中一個關(guān)鍵基因一FVE基因，且T-DNA的插入位點位于基因的第六個外顯子上

3、。該突變體與已有的突變體fve-1、fve-2(Ler生態(tài)型)是等位突變體，與fve-3(Col-0生態(tài)型)是同一基因的不同突變體。因此，將該突變體命名為fve-4。突變體fve-1、fve-2、fve-3和fve-4都是FVE基因發(fā)生突變，但在FIrE基因中的突變位置不同(分別是第七個外顯子，第八個外顯子，第一個外顯子和第六個外顯子)，且推遲開花的時間不同(fve-1推遲開花時間為12d，fve-2推遲開花時間為20d，而fve-4推

4、遲開花時間長達(dá)60d左右)。 利用Genomie Walking技術(shù)獲得了早花突變體T-DNA插入位點的側(cè)翼序列。將所獲得序列與TAIR中的已知基因序列進行同源性比對，確定了早花相關(guān)基因為AT4G36680.1基因(命名為EFS1)，且T-DNA的插入位點位于AT4G36680.1基因的5'非編碼區(qū)。該基因具有PPR(pentatricopeptide repeats)家族蛋白和異戊烯基轉(zhuǎn)移酶(IPT)的結(jié)構(gòu)域，并在鹽脅迫方面起