穴位埋線治療變應(yīng)性鼻炎的臨床療效和安全性評(píng)價(jià)及相關(guān)機(jī)制的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：評(píng)價(jià)穴位埋線治療變應(yīng)性鼻炎（Allergic Rhinitis，AR）的臨床療效和安全性，探討穴位埋線對(duì)變應(yīng)性鼻炎機(jī)體鼻黏膜神經(jīng)源性炎癥及免疫相關(guān)基因表達(dá)譜的調(diào)節(jié)作用，從臨床和基礎(chǔ)兩方面為為穴位埋線治療AR的臨床運(yùn)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：①采用隨機(jī)、盲法、對(duì)照的臨床研究方法，通過(guò)EXCEL軟件RAND函數(shù)產(chǎn)生隨機(jī)數(shù)字，將符合納入標(biāo)準(zhǔn)的128名AR受試者分為A組（穴位埋線組）和B組（穴位假埋線組）。兩組均采用相同的取穴方案

2、，每位受試者共接受兩次穴位埋線/假埋線治療，兩次治療間隔2周。以視覺(jué)模擬評(píng)分量表（visual analogue scale，VAS）積分及鼻眼結(jié)膜相關(guān)生活質(zhì)量問(wèn)卷調(diào)查量表（Rhinocoujunctivitis Quality of Life Questionaire）（中文版自測(cè)版本）積分為主要的療效評(píng)價(jià)指標(biāo)，以鼻內(nèi)鏡檢查，以及血清特異性IgE、IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ及VCAM-1等實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)作為第二療效評(píng)

3、價(jià)指標(biāo)，治療期間的合并用藥情況、受試者的不良反應(yīng)也將被記錄。在治療前、治療結(jié)束后4周（血清學(xué)指標(biāo)該時(shí)間點(diǎn)未行檢測(cè)）、治療后8周不同時(shí)間點(diǎn)隨訪受試者，評(píng)價(jià)穴位埋線/假埋線的臨床療效及安全性。②以卵清蛋白致敏SD大鼠的方法制作變應(yīng)性鼻炎動(dòng)物模型,分為治療組A和對(duì)照組B，另設(shè)空白組C。每組各15只SD大鼠。A組迎香穴（LI20）埋線，B組不行任何治療。A組大鼠行迎香穴穴位埋線治療。治療后10天，同時(shí)取各組大鼠鼻黏膜組織，行HE染色及感覺(jué)神經(jīng)肽

4、—P物質(zhì)(substance P,SP)、降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）和神經(jīng)激肽A(neurokinin A，NKA）的免疫組織化學(xué)染色。觀察以下內(nèi)容：造模及治療期間大鼠變應(yīng)性鼻炎相關(guān)的行為學(xué)評(píng)分變化；光鏡下每張切片以嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)情況為主的炎癥病變情況；感覺(jué)神經(jīng)肽免疫組化染色情況及積分光密度值（iOD）的測(cè)定情況。③采用方法2中同樣的造模、分組及干預(yù)方法，每組SD大鼠各

5、3只。A組大鼠第二次迎香穴埋線后取各組大鼠鼻黏膜，經(jīng)RNA抽提、純化、質(zhì)量檢測(cè)、cDNA合成后，以第二代功能分類 Real-time PCR芯片----The Rat Inflammatory Response&Autoimmunity RT2 Profiler?PCR Array（含84個(gè)目標(biāo)基因）研究穴位埋線治療后鼻黏膜免疫相關(guān)基因表達(dá)譜的改變情況，并以ΔΔCt方法進(jìn)行三組間兩兩比較的數(shù)據(jù)分析。
　　結(jié)果：⑴2組受試者的人口學(xué)

6、特征、生命體征、病史病情等基線資料具有可比性。⑵VAS量表評(píng)價(jià)結(jié)果顯示：2組受試者穴位埋線/假埋線在治療后4周、治療后8周與治療前相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。而兩組受試者間橫向比較，在治療后4周無(wú)組間差異(P=0.753)，治療后8周組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。⑶RQLQ問(wèn)卷調(diào)查表的結(jié)果顯示：2組受試者穴位埋線/假埋線在治療后4周、治療后8周與治療前相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。且兩組受試者間

7、橫向比較，在治療后4周、治療后8周組間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。⑷鼻內(nèi)鏡檢查結(jié)果：2組受試者鼻黏膜顏色的變化，治療后4周與治療前相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.470)；但治療后8周與治療前相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鼻分泌物、下鼻甲大小，2組治療后4周及治療后8周行自身前后對(duì)照，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。2組受試者的組間橫向比較，下鼻甲大小及鼻分泌物評(píng)分項(xiàng)，在治療結(jié)束后4周、8周，A、B兩組間的差異

8、均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但鼻黏膜顏色項(xiàng)，在各療效評(píng)價(jià)點(diǎn)的組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.200）。⑸實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)：組內(nèi)自身前后對(duì)照，A、B組的血清特異性 IgE在治療前后的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而其余指標(biāo)的變化在治療前后無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.100）。組間橫向比較，A、B組間的血清特異性 IgE在治療前及治療后的組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而其余實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)在治療前、治療后8周兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0

9、.05）。⑹對(duì)大鼠變應(yīng)性鼻炎相關(guān)的行為學(xué)評(píng)分的影響：對(duì)組間噴嚏、流涕、抓撓單個(gè)條目分別進(jìn)行單因素方差分析，按照α=0.05的檢驗(yàn)水準(zhǔn)，三組間變應(yīng)性鼻炎行為學(xué)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P≤0.01）。以LSD法行組間兩兩比較時(shí)，行為學(xué)評(píng)分的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。⑺鼻黏膜HE染色結(jié)果：光鏡下，變應(yīng)性鼻炎對(duì)照組(B組)鼻黏膜纖毛倒伏、脫落，查見(jiàn)大量嗜酸性粒細(xì)胞及少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。穴位埋線組（A組）少量上皮脫落，腺體輕度增生，炎癥反應(yīng)較

10、B組有所減輕?？瞻捉M(C組)纖毛整齊無(wú)脫落，未見(jiàn)明顯嗜酸性粒細(xì)胞及異染細(xì)胞浸潤(rùn)。⑻感覺(jué)神經(jīng)肽免疫組化及積分光密度值測(cè)定結(jié)果：A、B、C三組大鼠鼻黏膜的SP、CGRP、NKA的免疫組化染色均呈現(xiàn)出了B組鼻黏膜細(xì)胞內(nèi)棕黃色陽(yáng)性顆粒較多，甚至成片分布；A組次之；C組最少的趨勢(shì)。積分光密度值經(jīng)兩兩比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。⑻本研究提取的9個(gè)樣本提取的鼻黏膜RNA合符要求。⑽PCR檢測(cè)中擴(kuò)增曲線中大部分Ct值均在20～35范圍

11、內(nèi)，曲線拐點(diǎn)清楚，特別是低濃度樣本指數(shù)期明顯，基線平而無(wú)上揚(yáng)現(xiàn)象，各孔的擴(kuò)增曲線平行性好，表明各反應(yīng)管的擴(kuò)增效率相近。擴(kuò)增曲線的結(jié)果表明該 PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序設(shè)置合理。⑾各樣本每個(gè)PCR產(chǎn)物的熔解曲線均為單峰，表示擴(kuò)增產(chǎn)物單一，無(wú)非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。⑿B組的檢測(cè)值（2^-ΔCt）與A組檢測(cè)值（2^-ΔCt）相比，在這些免疫反應(yīng)相關(guān)基因中，有2個(gè)上調(diào)基因，這2個(gè)基因的組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；下調(diào)倍數(shù)大于3或下調(diào)倍數(shù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的基因有

12、基因有17個(gè)，其中組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的下調(diào)基因有10個(gè)。⒀C組的檢測(cè)值（2^-ΔCt）與B組檢測(cè)值（2^-ΔCt）相比，得出:在這些免疫反應(yīng)相關(guān)基因中，無(wú)上調(diào)基因；下調(diào)倍數(shù)大于3基因有23個(gè)，這些基因的組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⒁C組的檢測(cè)值（2^-ΔCt）與A組檢測(cè)值（2^-ΔCt）相比，得出:在這些免疫反應(yīng)相關(guān)基因中，無(wú)上調(diào)基因；下調(diào)倍數(shù)大于3的基因有44個(gè)，其中9個(gè)下調(diào)基因的組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：①穴位埋線及假

13、埋線均有助于改善變應(yīng)性鼻炎患者的癥狀（VAS評(píng)分）及相關(guān)的生活質(zhì)量（RQLQ評(píng)分）。但穴位埋線組由于有埋入線體的持續(xù)刺激，該組受試者的癥狀（VAS評(píng)分）及相關(guān)的生活質(zhì)量（RQLQ評(píng)分）改善較假埋線組更持久。穴位埋線也有助于改善受試者的鼻黏膜顏色、鼻分泌物、下鼻甲的腫脹情況，以及受試者治療前后血清特異性 IgE的表達(dá)情況，但對(duì)參與免疫反應(yīng)的其他細(xì)胞因子無(wú)改善作用。②穴位埋線可能通過(guò)改善感覺(jué)神經(jīng)肽參與的鼻腔神經(jīng)源性炎癥而減輕變應(yīng)性鼻炎的狀況

14、。但穴位埋線治療的AR大鼠模型組，經(jīng)治療，癥狀雖較治療前緩解，但與空白組相比，組間感覺(jué)神經(jīng)肽的表達(dá)差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示雖然沒(méi)有明顯癥狀，但是黏膜的炎癥狀態(tài)仍在持續(xù)。③利用功能性分類基因芯片技術(shù)有的放矢地對(duì)穴位埋線治療的變應(yīng)性鼻炎動(dòng)物的鼻黏膜的免疫相關(guān)基因表達(dá)譜進(jìn)行差異表達(dá)基因的篩選是可行的。與全基因表達(dá)譜芯片的研究相比，該方法能夠更為快速、準(zhǔn)確地篩選出目標(biāo)基因，進(jìn)而為穴位埋線治療變應(yīng)性鼻炎的治療方法提供理論依據(jù)，并為進(jìn)一步的研究指明