轉(zhuǎn)牛MyoG和Myf6基因F1代小鼠脾臟免疫功能的比較.pdf

1、轉(zhuǎn)基因技術(shù)是上世紀80年代發(fā)展起來的一項生物技術(shù)，在此基礎(chǔ)上，人們開始制備帶有優(yōu)良性狀的轉(zhuǎn)基因動物，將轉(zhuǎn)基因動物應用到畜牧業(yè)、醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)、生命科學、食品科學等領(lǐng)域中去，使轉(zhuǎn)基因動物的研究蓬勃發(fā)展，展現(xiàn)出良好的應用前景，受到人們的廣泛關(guān)注。
　　近二十年來，轉(zhuǎn)基因動物研究發(fā)展迅速，獲得了多種轉(zhuǎn)基因動物，但在畜牧生產(chǎn)中，轉(zhuǎn)基因家畜要達到商業(yè)化育種還有很多問題亟待解決，例如，轉(zhuǎn)基因動物抗病力低、死亡率高、生產(chǎn)性能低下等，這不僅嚴重影響了轉(zhuǎn)

2、基因動物的健康，對人類健康、社會穩(wěn)定和環(huán)境安全也存在著潛在的威脅。
　　為了研究外源基因?qū)雽λ拗髅庖吖δ艿挠绊?，我們選擇F1代轉(zhuǎn)MyoG和Myf6基因小鼠為研究對象，通過RT-PCR、MTT和ANAE等方法，研究外源基因整合對宿主脾臟的細胞免疫和體液免疫及相關(guān)細胞因子mRNA表達水平的影響，進一步推動了轉(zhuǎn)基因技術(shù)在遺傳育種上的應用。本文研究主要內(nèi)容如下:
　　1)提取了F1代轉(zhuǎn)基因小鼠的基因組，采用普通PCR方法對小鼠DN

3、A進行鑒定，篩選具有外源基因的小鼠作為后續(xù)研究對象。結(jié)果顯示，共獲得6只轉(zhuǎn)牛MyoG基因小鼠和7只轉(zhuǎn)牛Myf6基因小鼠。
　　2)采用絕對熒光定量PCR法檢測了F1代小鼠的拷貝數(shù)。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)MyoG基因小鼠大多為6-7個拷貝，轉(zhuǎn)牛Myf6基因小鼠則是1-2個拷貝。
　　3)檢測了轉(zhuǎn)基因小鼠的脾臟指數(shù)、淋巴細胞增殖能力、T淋巴數(shù)量與淋巴細胞凋亡率。結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)基因小鼠在脾臟指數(shù)、淋巴細胞增殖能力均顯著下降;T淋巴細胞數(shù)量在轉(zhuǎn)

4、牛Myf6基因小鼠中均極顯著降低(P＜0.01)，在轉(zhuǎn)牛MyoG基因中小鼠中也下降了，但個別差異不顯著;淋巴細胞凋亡凋亡率極顯著升高(P＜0.01)，表明轉(zhuǎn)基因小鼠的免疫功能受抑制。
　　4)通過熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)基因小鼠的脾臟IL-2、IFN-γ、 IL-4、IL-6及TNF-a mRNA表達情況。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)牛MyoG和轉(zhuǎn)牛Myf6基因小鼠脾臟中IL-2和IFN-γ mRNA的表達下降，證明外源基因插入抑制了宿主脾臟的細胞免

5、疫功能;轉(zhuǎn)Myf6小鼠IL-4的表達顯著降低，而轉(zhuǎn)牛MyoG基因小鼠的降低不明顯，證明外源基因的插入會抑制小鼠的體液免疫;部分轉(zhuǎn)牛MyoG和Myf6基因小鼠中IL-6和TNF-a表達上調(diào)，提示外源基因的插入使機體免疫力下降并且發(fā)生了炎癥反應。
　　5)比較兩種轉(zhuǎn)牛基因小鼠的外源基因拷貝數(shù)與機體免疫力之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)牛MyoG小鼠的外源基因拷貝數(shù)明顯多于轉(zhuǎn)牛Myf6小鼠，但是轉(zhuǎn)牛MyoG小鼠的脾臟指數(shù)、T和B淋巴細胞增殖能力及T淋