不同抗原在小鼠脾臟和胸腺內(nèi)誘導的免疫效應.pdf

1、研究背景及目的:
　　胸腺是哺乳動物的中樞免疫器官，骨髓來源的前T淋巴細胞在此發(fā)育、分化和成熟，然后遷移到外周免疫器官參與免疫應答，胸腺為T淋巴細胞的發(fā)育過程提供了必要的微環(huán)境，經(jīng)典的免疫學理論認為，T細胞在發(fā)育的過程中會與表達自身MHC分子的細胞相互作用，經(jīng)歷陽性選擇和陰性選擇篩選出對外界抗原免疫應答而對自身抗原免疫耐受的成熟T淋巴細胞。同時根據(jù)中樞耐受的誘導理論，T淋巴細胞在發(fā)育成熟的過程中，一旦接觸到同種異基因抗原就會誘導出

2、對該抗原免疫耐受。由于血胸屏障的存在，血液中的大分子物質(zhì)包括外界抗原不能夠進入胸腺，所以早前對于胸腺內(nèi)的免疫及其相關機制研究未能受到關注。
　　脾臟是哺乳動物的外周免疫器官，當外界抗原侵入機體，在脾臟會引發(fā)特異性的細胞免疫和體液免疫。脾臟內(nèi)也存在血-脾屏障，血-脾屏障有很強的選擇透過性，這種選擇性針對的是抗原的性質(zhì)而非完全是抗原的大小，但抗原在脾臟內(nèi)發(fā)生免疫應答時是否對胸腺的微環(huán)境有影響？目前卻鮮有報道。
　　為探索不同抗原

3、在小鼠脾臟和胸腺內(nèi)誘導的免疫效應，我們首先采用AFP（人甲胎蛋白）作為外源性抗原分子，對C57BL/6小鼠進行免疫，研究胸腺和脾臟對外界抗原的免疫狀態(tài)有何不同，并采用人肝癌細胞HepG2作為異種抗原細胞在C57BL/6小鼠胸腺內(nèi)注射的方法，研究了異種抗原細胞在胸腺中的命運及其可能誘導的免疫效應。
　　研究方法:
　　1.外源性抗原分子（人AFP）經(jīng)外周免疫后對小鼠脾臟和胸腺的影響
　　1) C57BL/6小鼠的外周AF

4、P免疫
　　2) C57BL/6小鼠脾臟和胸腺稱重及各自總淋巴細胞的計數(shù)
　　3) C57BL/6小鼠脾臟石蠟切片的制作及HE染色
　　2.外源性抗原細胞（人HepG2）在小鼠胸腺內(nèi)誘導的免疫應答
　　1) C57BL/6小鼠胸腺發(fā)育情況的分析
　　2) HepG2細胞培養(yǎng)與熒光材料DiI標記
　　3) HepG2細胞的C57BL/6小鼠胸腺內(nèi)注射及注射結(jié)果的解剖學觀察
　　4)不同時間檢點的胸

5、腺石蠟切片的制作與HE染色觀察
　　5)不同時間檢點的石蠟切片與熒光顯微鏡觀察
　　研究結(jié)果:
　　第一部分
　　1.一次免疫組小鼠的脾臟重量和總淋巴細胞數(shù)比對照組小鼠的脾重和總淋巴細胞數(shù)略微提高，胸腺重量和總淋巴細胞數(shù)較對照組都略微降低，但總體變化不明顯。再次免疫組的脾臟重量與總淋巴細胞數(shù)與對照組和一次免疫組有明顯的差別，其重量是對照組的2.6倍以上，總淋巴細胞數(shù)目是對照組的10倍以上，再次免疫組的胸腺重量與一

6、次免疫組和對照組無明顯差異。
　　2.一次免疫組小鼠的脾臟白髓與紅髓比例與對照組相似，而再次免疫小鼠的脾臟白髓比例明顯增加。
　　第二部分
　　1.C57BL/6小鼠胸腺從出生到青春發(fā)育期一直在快速的增長，其體積和重量都有明顯增加，在6周左右時到頂峰，之后胸腺開始萎縮，體積變小，重量下降。
　　2.HepG2細胞被全部標記，在綠色熒光的激發(fā)下細胞發(fā)出強烈的紅色熒光。
　　3.不同時間檢點的胸腺都顯現(xiàn)出被標記

7、的腫瘤細胞或組織，表明肝癌細胞在胸腺內(nèi)注射成功。
　　4.小鼠胸腺對異種抗原細胞產(chǎn)生免疫排斥，3-14天胸腺上皮細胞對腫瘤組織進行完全包繞，逐步出現(xiàn)淋巴細胞浸潤，巨噬細胞聚集，最終導致腫瘤組織壞死。
　　5.在腫瘤組織形成初期，周圍聚集有大量的淋巴細胞，5天左右出現(xiàn)淋巴細胞在腫瘤組織內(nèi)的浸潤，7天左右腫瘤細胞出現(xiàn)大量死亡，在腫瘤塊中心的淋巴細胞浸潤區(qū)可觀察到有空洞狀斑塊的出現(xiàn)。
　　結(jié)論:
　　1.AFP抗原免疫