孕期DEHP暴露對F1代雄性小鼠睪丸早期發(fā)育的影響及機(jī)制研究.pdf

1、鄰苯二甲酸二（2-乙基-己基）酯（DEHP）作為環(huán)境中豐富存在的內(nèi)分泌干擾物，易于遷入環(huán)境，不易被降解，已受到人們的普遍重視?，F(xiàn)有實(shí)驗(yàn)證明DEHP會(huì)造成神經(jīng)、甲狀腺、腎臟、心臟、生殖發(fā)育等多方面毒性，與雌性相比雄性生殖系統(tǒng)對 DEHP更為敏感。目前為止，已證明 DEHP暴露可以造成雄性個(gè)體附睪、睪丸、前列腺的濕重顯著降低，肛殖距顯著減小，并能引發(fā)隱睪等多種生殖損傷。其具體損傷機(jī)制包括影響雄鼠睪丸DNA甲基化狀態(tài)、誘導(dǎo)生精細(xì)胞發(fā)生凋亡、抑

2、制生精細(xì)胞增殖、影響雄激素的合成、誘導(dǎo)生精細(xì)胞產(chǎn)生DNA損傷等。
　　本研究在ICR小鼠懷孕的第9.5天到第15.5天通過灌胃進(jìn)行不同濃度的DEHP暴露（75mg/kg/d,225mg/kg/d,675mg/kg/d），分別在F1代雄性小鼠胚胎期第18.5天以及出生后14、28、35天取材，應(yīng)用HE染色和透射電鏡技術(shù)，在組織學(xué)水平和超微結(jié)構(gòu)水平研究孕期DEHP暴露對F1代雄性胎鼠和青春期小鼠造成的睪丸病理損傷；并進(jìn)一步應(yīng)用West

3、ern blot、TUNEL檢測、免疫組織化學(xué)檢測等實(shí)驗(yàn)方法，從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡、細(xì)胞增殖和睪酮合成及代謝等方面探究DEHP造成雄性生殖損傷的具體作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)孕期DEHP暴露后造成：胚胎期生精小管數(shù)目顯著減少，出生后生精小管管間和生精細(xì)胞間間隙增大、空泡化、斷層、染色異常和脫落的細(xì)胞數(shù)目增加、生精細(xì)胞排列紊亂；睪丸生精細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯腫脹；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78相對表達(dá)量在出生后14d和28d顯著下調(diào)，35

4、d顯著上調(diào)；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的標(biāo)志分子Cleaved Caspase12的蛋白相對表達(dá)量，在出生后28d和35d顯著上調(diào)；出生后35d睪丸細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯增加；睪丸中PCNA表達(dá)陽性的生精小管比例顯著下調(diào)；間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)明顯減少；部分線粒體形態(tài)異常；STARD10的蛋白相對表達(dá)量，在胚胎18.5d675mg/kg/d劑量組顯著下調(diào)；雄激素結(jié)合蛋白ABP1的表達(dá)量明顯下降。綜上所述，孕期DEHP暴露對發(fā)育早期的F1代雄性小鼠睪丸會(huì)