內(nèi)皮抑素緩釋藥物抑制大鼠視網(wǎng)膜新生血管的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察眼內(nèi)植入長(zhǎng)效型內(nèi)皮抑素緩藥物(Endostatindrugdeliverysystem，ESDDS)抑制S.D.大鼠視網(wǎng)膜新生血管的療效，觀察ESDDS眼內(nèi)釋藥量的變化。 方法:(1)ESDDS體外釋放試驗(yàn)：將內(nèi)皮抑素凍干粉與乙交酯-丙交酯-己內(nèi)酯三元共聚物(polyclatide-coglycolide-co-caprolactone，PGLC)制作成ESDDS，ES與PGLC載體的質(zhì)量比W/W=1/1，共設(shè)計(jì)兩種劑

2、量：分別為含ES250μg、500μg。將ESDDS置于去1ml離子水，37℃下釋放，每24小時(shí)置換一次釋放液，共釋放3個(gè)月，酶聯(lián)免疫吸附方法(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)測(cè)定每天ES釋放量，描繪ES體外釋放曲線(xiàn);(2)ESDDS抑制視網(wǎng)膜新生血管的實(shí)驗(yàn)研究：將新生S.D.大鼠60只，在出生后4小時(shí)內(nèi)放入可變氧濃度的氧培養(yǎng)箱內(nèi)飼養(yǎng)，氧濃度設(shè)置為(50±2)％/(10±2)％，每24小時(shí)變換

3、一次，生后14天出氧培養(yǎng)箱。將其隨機(jī)分為A、B、C、D共4組，每組15只；A組為對(duì)照組，不給予任何治療；B、C、D組在生后16天玻璃體腔內(nèi)分別植入空白載體PGLC、250ESDDSμg、500μgESDDS。術(shù)后1、3、5天及處死大鼠前觀察角膜、前房、房水等眼前節(jié)變化。生后21、27、34天每個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死5只大鼠，1只取出眼球、ADPase染色、計(jì)數(shù)視網(wǎng)膜新生血管的鐘點(diǎn)數(shù)，3只EvansBlue灌注，視網(wǎng)膜鋪片，觀察新生血管滲漏及鐘點(diǎn)數(shù)

4、，治療眼與對(duì)側(cè)眼對(duì)照，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；1只取出眼球、視網(wǎng)膜切片，光鏡下計(jì)數(shù)突破內(nèi)界膜的細(xì)胞核數(shù)，治療眼與對(duì)側(cè)眼對(duì)照，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;(3)藥物濃度檢測(cè)：將生后16天正常S.D.大鼠36只隨機(jī)分成三組：Ⅰ組、對(duì)照組，不給予處理，12只；Ⅱ組、PGLC空白載體玻璃體腔植入組，12只；Ⅲ組、500μgESDDS玻璃體腔植入組，12只。術(shù)后1、3、5天及處死大鼠前裂隙燈檢查眼前節(jié)變化，術(shù)后1、3、5、8、10、12周每個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死2只大鼠，抽取玻璃

5、體液ELISA檢測(cè)ES的濃度，取視網(wǎng)膜行蘇木精-伊紅染色、制作透射電鏡標(biāo)本，進(jìn)行視網(wǎng)膜組織病理學(xué)及超微結(jié)構(gòu)檢查，并取部分肝、腎組織，HE染色光鏡下檢查肝、腎組織病理結(jié)構(gòu)。 結(jié)果:(1)250μgESDDS、500μgESDDS體外恒速釋放，持續(xù)3個(gè)月，每天釋放ES分別約為1μg、2μg，3個(gè)月后250μgESDDS每天釋放量驟然下降;(2)ESDDS抑制視網(wǎng)膜新生血管的實(shí)驗(yàn)研究：500μgESDDS玻璃體腔植入組，生后21、27

6、天較對(duì)照組新生血管明顯減少，血管滲漏減輕；250μgESDDS玻璃體腔植入組較對(duì)照組新生血管及滲漏減少，但不如500μgESDDS玻璃體腔植入組明顯;(3)藥物濃度檢測(cè)：玻璃體腔植入500μgESDDS后1周，玻璃體中ES濃度達(dá)到1.32μg/ml，3周時(shí)達(dá)到恒速釋放，在玻璃體腔內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定有效藥物濃度18.42±0.37μg/ml，維持到術(shù)后3個(gè)月。術(shù)后每時(shí)間點(diǎn)取視網(wǎng)膜光鏡、電鏡下觀察，見(jiàn)各層結(jié)構(gòu)排列整齊、超微結(jié)構(gòu)正常；肝、腎光鏡下結(jié)構(gòu)